时间：2023-05-29 17:49:04
古代人常用“鸡蛋碰石头”来比喻自不量力。可见，鸡蛋是极易碎的，轻轻一磕就碎了。如果说鸡蛋能从十几米高的地方落下而安然无恙，那简直就是天方夜谭。但是科学有时能将不可思议的事情变为现实。今天，就让我们共同走进这个神话吧。
首先，让我们明确一下从十几米的高空落下是一个什么概念。不难算出，若不计空气阻力，物体落地时的速度将达到十多米每秒。为了让大家更好地明白这么快的速度将产生什么样的作用效果，我打一个比方。这就好比一辆时速达40km/h的汽车突然撞到了墙上，后果可想而知。如果不采取任何措施，不要说是鸡蛋，就是一块石头，恐怕也要粉身碎骨。
这样一件看似不可能的事情，是否就不可办到呢？不是的，科学的魅力正在于此。只要我们依据正确的科学道理，提出可行的解决方案，再经过一次次实践的检验，不断改进，是完全可以办到的。
今天，第四届科技节的“高空坠蛋”比赛给我们提供了自由发挥的机会。让我们放飞想象的翅膀，来创造这个奇迹！
比赛规则：
将一个采取了一定保护措施的鸡蛋从五楼阳台上扔下，使其自由下落。在鸡蛋不破的前提下，整个装置重量（不包括鸡蛋）越小，落地点距指规定的地点越近，其比赛成绩就越靠前。
一、科学道理：
（一）、理论依据：
1、动量定理表达式：Ft =△p
其中△p指的是动量的变化，F指的是冲力的大小，t指的是力的作用时间。
由于鸡蛋在下落的过程中，动量的变化△p一定，鸡蛋所受的力F与力的作用时间t成反比，即t越大，F就越小，作用在鸡蛋上的力就越小。这样，鸡蛋就不容易碎了。
2、由空中垂直下落的物体所受空气阻力f与空气的密度ρ、物体的有效横截面积S、下落的速率v的平方成正比，阻力的大小可表示为f=CρSv2，其中C为阻力系数，一般在0.2～0.5之间，ρ=1.2kg/m3，物体下落经过一段时间将达匀速，这称为终极速率。
我们可以发现如下的一些日常现象：
雨滴在空气中下落，速度越来越快，所受空气阻力也越来越大。 当阻力增加到与雨滴所受重力相等时，二力平衡，雨滴开始匀速下落。
跳伞运动员在空中张开降落伞，凭借着降落伞较大的横截面积取得较大的空气阻力，得以比较缓慢地降落。这些都是这个公式在生活中的应用。
明白了这以后，就不会认为装置的加速度是9.8m/s2了。
3、一切物体都具有惯性。在“高空坠蛋”整个装置落地的一瞬间，装置静止，然而鸡蛋由于惯性，还会继续运动，造成与装置挤压、碰撞，容易损坏。如何将鸡蛋由于具有惯性而造成的影响降到最低，还需要我们进一步分析解决。
（二）、规则分析：
有了理论指导，就可以分析比赛规则了。目的是在不违反比赛规则的情况下，充分考虑各方面的影响和应当解决的问题，以制定切实可行的方案。
由于比赛规则有一个大前提就是鸡蛋不破，鸡蛋一旦破了，便会被淘汰，一切努力也就白费了。因此，最重要的就是要保证鸡蛋不破，然后再考虑如何使装置重量尽可能小，使装置稳定性尽可能高。保证鸡蛋不破就要加强保护措施；重量尽可能小就要选用密度小的材料，能省就省；稳定性尽可能高，一是要投得准，二是装置受大气影响尽可能小。
二、方案设计：
在前面理论依据的支持下，又认真分析了比赛规则，找到了问题的关键所在，现在可以制定可行性方案了。
结合在同学们中的调查和全国各地举行过类似比赛的方案来看，比较常见的、有一定可行性的方案有以下几种：
1、降落伞型：
降落伞型，顾名思义，就是利用降落伞，增大空气阻力，以使鸡蛋连同整个装置平稳落地。
这种方案最容易想到，因为跳伞、宇宙飞船减速，都运用了这个方法，效果很好。安全性极高，使整个装置达到较小的速度即可匀速下落。装置的重量也不会很重。唯一的缺点就是：受大气扰动影响太厉害，会使实验装置飘忽不定，准确性较差，往往不能落到指定位置，从而影响了比赛成绩。
2、外包装型：
外包装型，就是用较多的减震材料将鸡蛋严严实实地包裹起来。比如泡沫、棉花、各种填充材料等。通过这些材料的缓冲作用，达到保护鸡蛋的目的。
这种方案也较容易想到。平常生活中用各种填充材料保护贵重用品的方法相信大家都见到过。这的确是一个有效的方法。这种方案由于受空气阻力影响很小，所以准确性较高。由于所使用的材料都是密度极小的，所以可将整个装置的重量降到最低。但美中不足的是：整个装置是自由下落状态，到达地面时的速度较大，因而对装置的坚固度和缓冲效果要求较高，安全性稍差一点。
3、不倒翁型：
不倒翁型，就是使整个装置像不倒翁一样，把重心尽可能降低，使得装置下落时能保持稳定状态，确保始终让一个面着地。那么保护工作只需要在这一个面做好就行了，从而节省了材料。
这种方案充分考虑到了上一种方案可能出现在空中翻滚现象，经过改进形成的。其可靠性远远高于第一种方案，材料更节省，准确性更高。美中不足的就是为了确保装置的重心降低，势必要在底部放上一个质量较大的物体，这就大大加重整个装置，将影响比赛成绩。
4、多面体型：
多面体型，就是把整个装置制作成一个多面体，将鸡蛋用结实的绳子固定在多面体的中央，使整个鸡蛋悬空。装置落地后，不论哪个面着地，鸡蛋都不会着地，鸡蛋就完好无损了。
这种方案无需额外的材料，只需要制作多面体的骨架和几根线即可，用料极其节省，因而重量会大大降低。因受空气阻力较小，所以稳定性较好。但这种方案也有一个大的缺点就是多面体不易扎制，结实程度不高，落地后可能会散架，鸡蛋也就岌岌可危了。
5、双气球型：
双气球型，就是将鸡蛋放在一个气球中，充入一定量空气，在外面再套一个气球，充入适量空气。这样两层气球之间就会形成一个气垫，会使鸡蛋免受地面的冲击。
这种方案所用材料应该是所有方案中最省的，重量只是两个气球的重量，几乎可以忽略不计。但这种方案有一个致命的缺点就是两层气球之间有一块是紧密接触的，没有气垫的保护，如果此面着地，一切都完了。另外，由于重量太轻，受空气扰动影响，其稳定性也不是很好。
6、螺旋桨型：
螺旋桨型，就是在整个装置上方安置一个螺旋桨，靠流动的空气推动或遥控，使螺旋桨旋转起来，以提高安全性和准确度。这极像直升飞机的飞行原理。
这种方案因螺旋桨的转动而减小了装置下落的速度，安全性更高。如果是遥控，准确性也会很高。问题是如何保证螺旋桨始终朝上，螺旋桨一旦不朝上，准确性将无从谈起。如何保证螺旋桨平稳旋转也是一个问题。
7、滑翔机型：
滑翔机型，顾名思义，就是将鸡蛋悬挂在滑翔机下方，整个装置就会在空气中滑翔，最后会平稳地降落。
这种方案准确性极差，降落地点不确定。如果不限制落地点的话，这无疑是一个好方案，安全性较高。在这种比赛规则下，不提倡这种方法。
8、盐水型：
盐水型，就是配一个密度很大的氯化钠溶液，让鸡蛋漂浮在上面，落地后盐水就充当了缓冲材料，保证鸡蛋不破。
这种方案新颖独特，用盐水作缓冲，安全性较高，受到空气阻力影响很小，准确性较高。但装置不易控制，如果装置在空中翻滚，盐水洒出，就起不到保护作用了，因此，一定要保证装置重心要稳，并且尽可能降低。这种装置的重量问题也是不容忽视的，毕竟，盐水的密度要比泡沫大得多。
9、吸管组型：
吸管组型，用几根吸管绑在一起做成吸管组，将几组吸管组搭成金字塔形，将鸡蛋夹在中间，用胶条固定。吸管由于是中空的，可以起到缓冲作用。
这种方案材料来源广泛，重量轻，体积小，因而准确性较好。至于安全性嘛，可能要差一点，吸管的缓冲作用毕竟有限。
10、综合型：
综合型，就是将几种保护措施结合起来使用，造出的装置也是五花八门。
综合型装置的安全性肯定会大大提高，这是毫无疑问的。准确性很难说究竟是提高了还是降低了。不过有一点可以确定，那就是装置的总重量大大增加，可能会影响比赛成绩。
… …
上面大体介绍了十种方案。其实还有很多方案，就不一一列举了。不难看出，这十种方案各有利弊，很难找出一个十全十美的方案。而且，各种方案的偶然性较大。以上仅是从理论层面对各种方案进行了分析，实际操作中会有各种意想不到的事情发生。
三、实践检验：
（一）、外界影响分析：
受当时天气状况、场地情况、装置制作情况、鸡蛋的大小和形状等，都会对比赛结果产生一定影响。
1、天气状况的影响：
天气状况对这种比赛的影响可以说是非常大的。主要影响是风力的大小。理想的天气状况应该是几乎没有风，这样才能保证一些需要借助空气阻力来减速的装置能够平稳降落。如果风太大，那么降落伞型、螺旋桨型、双气球型等类型的实验装置就会在风中摇摆不定，准确性会很差，安全性也会大大降低。
2、场地情况的影响：
场地情况的好坏直接影响了比赛成绩。这里的场地场地主要是指装置落地的场地。理想的场地应该平坦、松软，这样会大大增加成功的几率。遗憾的是这次比赛场地是大理石地面，平坦尚还可以，但是坚硬无比，这无疑是对装置的一次严酷的考验。这就要求我们的装置一定要结实，缓冲效果要好。
3、装置制作情况的影响：
装置制作的好坏具有很大的不确定性。试验时试验成功并不代表着在正式比赛中会成功。因为试验时整个装置从十几米高的地方落下，会造成装置整体或局部的损坏，如果再用试验过的装置去比赛，这些损坏造成的影响便会显现出来。会让认为安全可靠的装置出现意外情况。如果再制作一个新的装置，即使原理跟试验时的装置一模一样也无法保证制作得和试验时的装置没有差别，问题往往就出现在这细小的差别上。
4、鸡蛋的大小和形状的影响：
也许你会问：鸡蛋的大小和形状还对试验效果有影响吗？回答是肯定的。经请教物理老师宋老师后得知：鸡蛋越小越不容易破。对此你可能会不理解，其实我也不明白。宋老师给了一个恰当的事例：将大小不等的一筐鸡蛋晃几晃，你会发现：大的鸡蛋先破，小的鸡蛋后破。由此可以得知：小的鸡蛋更结实一点。如果拿两个蛋壳厚薄不同不一样的鸡蛋相碰，一定是蛋壳薄的鸡蛋先破。由此可以得知：蛋壳厚的鸡蛋更结实一点。另外，形状规则的鸡蛋由于受力均匀，会比不规则的鸡蛋结实。因此，所用鸡蛋太长、太圆、太扁或鼓出一块、凹下一块都不行。
如果比赛规则允许自带鸡蛋的话，一定要注意以上内容。如果不让自带鸡蛋，只好听天由命了。
由此可以看出，这种比赛中许多不确定因素都是人们难以预料的。对于前两种影响，对每一个参赛者都是公平的。条件好对大家都好，条件不好对大家都不好。对于后两种影响，要求我们一定要细心，力求将装置调试得完美无缺，比赛时才能确保万无一失。
（二）、临场窍门：
一切准备工作准备就绪后，就只等着实地检验自己的装置了。
正式比赛也并不意味着结局已定。经分析，这里面还是有很多窍门的。
首先，一定要将自己的装置对准投掷点。如果没有对准投掷点，装置落地时还有什么准确度可言？对准投掷点，可以先向下扔一个小石子，看小石子落地点与起落点的关系，再根据这个确定自己装置的起落点。可以反复试验几次，以找到最好的起落点。
再次，对于要求稳定下落的装置，一定要调整好落地面朝下，确保重心稳定，装置的这种姿态一定要求重心最低，才会避免装置在空中翻滚、摇摆、抖动。如果重心不够低，可临时在装置底面捆绑一个重物。但这样会使装置重量大大增加，这是不得已而为之呀。
最后，尽量将装置置于所允许高度的最低点，这样下落高度就会降低，装置落地时的速度就会降低，增加了安全性。
四、最佳方案：
在充分考虑了各中方案的利弊和外界环境对装置影响的大小之后，我们选取了一个最佳方案，即外包装型。选取它的理由如下：
1、外包装型装置选用材料密度小，重量轻，能够以较少的材料，较轻的重量达到较好的保护效果。
2、稳定性高。因其受空气阻力的影响较小，可以沿着一条近似竖直向下的轨迹下落，如果起落点选得准，落地点也会很准。
3、排除了装置在空中翻滚可能造成的影响。由于鸡蛋周围各个方向的保护程度都是一样的，因此，装置哪一个面先着地，都会受到缓冲材料的保护。即使装置在空中翻滚，也不会对装置的安全性产生太大影响。
4、材料来源广泛。因为所选材料是泡沫、棉花等常见材料，因而便于寻找，装置的造价也不会太高。
5、成功几率高。只要保护材料足够厚，保护效果足够好就可以了。无须进行各种调试，使装置状态最佳。在下落过程中无须手动干预，就不会因人们可能的失误而对比赛产生影响了。
因而，“外包装型”方案应该是最好的。最好只是相对而言，其实这种方案也有缺点，那就是落地后可能会反弹，影响了准确性。
解决的方法就是在装置外包一层弹性较小的材料，使得装置落地后不会弹起。另外，在装置外面贴双面胶也是一个好方法。
五、总结分析：
方法一:把鸡蛋放在桌上,用手把迅速转动鸡蛋.手离开后观察:如果鸡蛋转动得很顺利,则为熟鸡蛋;反之,如果转动得不顺畅的,则为生鸡蛋.
因为熟蛋被转动时,蛋白蛋黄一起动,故转得顺利.反之,生蛋被转动时,只是蛋壳受力,而蛋白和蛋黄几乎未受力.由牛顿第一定律(惯性定律)可知,蛋白和蛋黄因惯性几乎停留不动.于是,蛋壳的转动就被蛋白拖慢了.
方法二:待鸡蛋转动一段时间之后,突然按停鸡蛋,并立即缩手.如果缩手后不再转动的,则为熟蛋;反之,缩手后能自动再转几下的,则为生蛋.
因为熟蛋被按停时,蛋壳、蛋白和蛋黄都全部停止,缩手后就继续静止.反之,生蛋在按停时,只是蛋壳暂时停止,但蛋白和蛋黄因惯性仍然转动.故缩手后,能带动蛋壳重新再转几下.
鸟击落飞机
我们知道,运动是相对的.当鸟儿与飞机相对而行时,虽然鸟儿的速度不是很大,但是飞机的飞行速度很大,这样对机来说,鸟儿的相对速度就很大.速度越大,撞击的力量就越大.
比如一只0.45kg的鸟,撞在速度为8km/h的飞机上时,就会产生1500N顿的力,要是撞在速度为960km/h的飞机上,那就要产生2.16×105N的力.如果是一只1.8kg的鸟撞在速度为700km/h的飞机上,产生的冲击力比炮弹的冲击力还要大.所以浑身是肉的鸟儿也能变成击落飞机的“炮弹”.
1962年11月,赫赫有名的“子爵号”飞机正在美国马里兰州伊利奥特市上空平稳地飞行,突然一声巨响,飞机从高空栽了下来.事后发现酿成这场空中悲剧的罪魁就是一只在空中慢慢翱翔的天鹅.
在我国也发生过类似的事情.1991年10月6日,海南海口市乐东机场,海军航空兵的一架“014号 ”飞机刚腾空而起,突然,“砰”的一声巨响,机体猛然一颤,飞行员发现左前三角挡风玻璃完全破碎,令人庆幸的是,飞行员凭着顽强的意志和娴熟的技术终于使飞机降落在跑道上.追究原因,撞碎飞机挡风玻璃的竟是一只迎面飞来的小鸟.
“啪――”这是什么声音？告诉你，这是学校在举行“鸡蛋撞地球”的科学实验比赛呢！
前几天，当科学老师向我们宣布这一消息后，教室里顿时沸腾了！科学老师告诉我们比赛规则：准备一颗鸡蛋，谁能让鸡蛋从三楼掉下来而不碎裂，谁就获胜。同学们争先恐后地报名，我也不例外。
放学后，我背起书包向家跑去，准备大干一场。进了家，来不及换鞋，就打开冰箱拿了一颗鸡蛋研究起来：“怎么才能让你从高空中掉下来而不被摔碎呢？”这时，爸爸正好下班回来，我便赶紧跑过去问爸爸。爸爸告诉我：“盐水可以让鸡蛋浮起来！”我听了，立即找来一个空奶茶杯，然后往里面倒了一些水，并放了大量的盐，最后把鸡蛋放进去。一分钟过去了，两分钟过去了……十分钟过去了，鸡蛋仍纹丝不动地躺在杯底。我想：会不会是盐太少了呢？于是，我又往杯子里加了一大勺盐，继续等鸡蛋浮起来。可那鸡蛋好像故意和我作对似的，依然无动于衷，我的心情顿时跌落谷底。正当我要对它失去信心时，鸡蛋竟奇迹般地浮了起来，我兴奋地叫道：“浮起来了！鸡蛋终于浮起来了！”我担心奶茶杯太脆弱，便找来几块海绵将杯身包住，再用胶带裹了一圈又一圈，直到把奶茶杯裹得像个大粽子似的。我仍不放心，又给鸡蛋宝宝买了一份“巨额保险”――小型降落伞。我用科学老师教的方法做了一个小型降落伞，把它安装在奶茶杯上。确保万无一失后，我才放心地上床睡觉了。
第二天早上，我带着“成果”来到了学校。“请吴t寒选手上场！”听到广播里念到我的名字，我怀着忐忑的心情走上了三楼的阳台旁。裁判问我：“准备好了吗？”顿时，我的心提到了嗓子眼，老师也为我捏了一把汗。“放！”只听裁判一声令下，那颗被层层包裹的鸡蛋宝宝就被我无情地抛弃了。“啪――”鸡蛋落地了！突然，楼下传来一阵欢呼。耶，鸡蛋没碎！鸡蛋落地了，我心中的石头也落地了。
这次有趣的“鸡蛋撞地球”实验让我明白，只有不停地探索，不断地坚持，才能享受到成功的喜悦！
点评
“鸡蛋撞地球”？这爆炸性的标题着实夺人眼球，令人吃惊，很好地激发了读者的阅读兴趣。整个实验过程曲折中有进展，如“鸡蛋仍纹丝不动地躺在杯底”“那鸡蛋好像故意和我作λ频模依然无动于衷”“鸡蛋竟奇迹般地浮了起来”，实践中有思考，如“会不会是盐太少了呢”“用科学老师教的方法做了一个小型降落伞”，间接印证了这次比赛的意义和目的所在――探索与坚持。
（文之君）
今天，老师宣布学校要举行“鸡蛋撞地球”活动。同学们议论纷纷，“鸡蛋撞地球”是什么?
老向我们解释了鸡蛋撞地球。
原来，这次活动，是要我们每人制作一个降落伞，然后把一枚鸡蛋放在上面。活动开始时，将降落伞从4楼扔下来，谁的降落伞漂浮的时间越长，得分越高。
回家后，我为第二天的活动开始做准备。
首先，我剪了一大一小两块布，然后用针线把它们连接起来。虽然简陋，但我相信它会取得一个好成绩。
第二天到了学校，我发现同学们的降落伞都是用塑料袋和小盒子做的，他们说这样的降落伞更好。我于是紧急又制作了一顶降落伞。我用的是平时带着的家乐福塑料袋以及我的药盒子，再问同学借来针线，一顶降落伞被我临时制作出来。
比赛开始了，我看着一顶顶降落伞从空中飘落，我惊喜地发现我的降落伞直到很后面才降到地面。这时，我才发现天空中有一朵淡紫色的花朵，仔细一看是一顶降落伞。比起花朵，那降落伞一张一合的样子更像是一只水母。
一分钟......两分钟......三分钟......
所有人惊讶地发现，那降落伞过了整整7分钟才掉下来，真是奇迹!
那降落伞的主人正是我们班的泡泡同学，大家欢呼着把她簇拥进了教室。
今天真是快乐的一天。
在我校的科技节上，我参加了名为“鸡蛋撞地球”实验的比赛。
你听了或许会觉得奇怪：“鸡蛋撞地球”不是自找死路吗？
起初我也这样想，侯老师似乎看出了我们的心思，耐心地为我们讲解：“这个实验是这样的：用一些材料将生鸡蛋包起来，然后从高空扔下去，要求鸡蛋无损，装置轻便，谁做到这两点谁就赢！”我听了高兴得不得了，展示自我的机会来啦！
中午，我带着“装备”来到实验室集合，刚进门就听到一片喧嚣声，有的向同学们讲解着自己的方案，有的面红耳赤地辩论着，有的一副胸有成竹的模样……比赛时间到，老师走进教室宣布：“比赛开始！”我迫不及待地按照自己的设计将蛋包装：我先用胶带为蛋穿了一件“防摔衣”，然后包了一层纸和几层破布，最后为它按上降落伞。
不一会儿，我的装置就完成了，我和搭档兴高采烈地跑向四楼准备试验。可今天的风很怪，忽大忽小，害得前几个班都没成功，快到我们了，我再三嘱咐搭档下扔时要轻轻放开装置，他点了点头说：“这事简单的很包在我身上。”我听了这才放心。风势渐弱，搭档见时机成熟就往下扔，那装置在空中慢慢地下降，好半天才落了地，我冲上前去打开来一看：蛋碎了个小口，我的希望破灭了。
怎么回事？难不成是在刚才下落过程中，跟其他班一样都撞了墙，应该是的，我估计就是在那时候破的。
这次实验虽然没有成功，但它让我体会到了科学家的艰辛：做科学实验不是一次性就可以成功的，要反复试验才能积累经验，才能做得更好。
江苏南通江苏省海门中学附属实验学校三年级:透明人1
一、2020年工作总结
1、利润完成情况
2020年经营利润1-12月份种禽实现利润1635万元，比目标减少利润1871万元，完成率46.63%
2、2020年收入
种鸡收入11237万元，比同期增加收入3152万元，比目标减少收入2247万元。
3、种禽利润盈亏分析
4、 产量达成情况
2020年累计种蛋4267万枚，较目标减少250万枚；2020年健雏产量3402万只，较目标减少157万只
5、 设备改造
全年共完成设备改造7项
6、 生物安全
二、2021年工作计划
1、鸡群周转计划：21年计划引种三批，实际引种四批：计划：吴家营、后方市、郑家庄共三批，新星庄原计划20年底，推迟到21年1月
鸡群淘汰三批：吴家营（3月）、方市（7月）、郑家庄（10月）
2、种蛋计划
一季度：郑家庄2月初正常开产，方市和吴家营做好后期的维持工作
二季度：郑家庄高峰的管理和维持，方市鸡群的后期管理（降死淘，稳产蛋）
三季度：新星庄和吴家营的开产和高峰管理工作，郑家庄的后期维持
四季度：
新星庄和吴家营的高峰后的管理工作
3、鸡苗计划
一季度：1月份根据自养上栏需求进行孵化，2月份除自养上栏外，剩余43万，A、苗情高于成本，进行外销，B、发展一部分合同户，做回3月份需要处理30万，同2月份的经营思路
二季度：做好鸡苗的外采工作，保证商品鸡场顺利上栏
三季度：鸡苗销售放养和采购工作
四季度：做好计划调整，出雏和上栏的同步调整
三、种鸡场工作达成措施
3.1空舍期管理
1、冲洗工时制：鸡群淘汰到进鸡按照工时制进行管理
计划用工924工时（22人编制，6周空舍）
2、落实冲洗责任制：签订冲洗责任状，保证鸡舍冲洗高效高质量
3、追踪检查机制：每天追踪落实冲洗进度，检查冲洗质量，发现问题
及时整改，保证整个冲洗进度
4、冲洗成本：降低冲洗期间的物料消耗
3.2、育成身价控制
1、降低用工数量：育成期每栋舍用工人数控制在1.5人
2、物料成本：降低物料消耗，充分发掘场内与其他场闲置物品的调用
3、药品疫苗：合理有序组织免疫，保证剂量准确降低疫苗的浪费量，强化鸡舍环境控制，避免药物成本的支出
4、设备保养：做好设备保养，降低设备维修费用
3.3育成均匀度提高
1、主要措施：
前后圈分栏管理，便于料量调整，利于运料均匀度提高；
2、及时采取限饲措施，保证鸡群的吃料时间；
3、分群管理：重视鸡群的分群管理工作，
做好小栏的饲养工作，降低大小鸡的体重差异
4、免疫工作：重视育成期的免疫，每次免疫至少2名主管参与
5、散料管理思路：每周抽查员工打料准确性
3.4产蛋期管理
1、首要工作：搞好安全生产和生物安全、稳定鸡群
2、鸡群管理：重视鸡群管理，强化大群中休产鸡和弱鸡的挑选，控好料量，减少浪费。
3、孵化管理：做好现有公鸡管理，关注体型和体况。
4、种蛋管理：种蛋挑选，种蛋熏蒸储存运输
5、基础管理：重点关注好每日水料、通风：均匀的运料，充足的饮水，减少鸡舍内的各项应激。
四、鸡苗达成措施
4.1鸡苗质量达成措施
孵化场把好三关：种蛋关、孵化关、雏鸡关
1、种蛋关：鸡场种蛋质量追踪和落实
种蛋储运管理：蛋车运输过程的监管、鸡场和孵化场蛋库
种蛋入孵计划的排布
2、孵化关： 孵化和出雏参数：不同种源和周龄（入孵时间）
各功能厅环控参数调整：夏季降温，冬季提温工作，
孵化器和出雏器温湿度校正和测量
照蛋和落盘细节的把关
3、雏鸡关：雏鸡质量挑选和淘汰
免疫质量的提升：杜绝漏免，降低渗漏
鸡苗储运过程的监管，发鸡前的复检工作
4.2鸡苗成本控制措施
1、成本控制关键：良好的生产成绩是成本控制核心
人员和电费占整个孵化制造费用的50%以上
2、人员管理：稳定好优秀员工，尤其是免疫岗位，探索小时工制度
优化工作流程，提高效率，降低强度，缩短工作时间
做好员工培训，提高员工技能水平，提高工作效率
落实岗位责任制，明确岗位职责
“不可能！”“吉老师逗我们玩儿呢！”“肯定有什么‘阴谋诡计’！”教室里充满了迷惑不解的声音。原来，今天的语文课是语言文字课，吉老师一声不响，故作神秘地在黑板上写下七个字：“铁锤锤蛋锤不破”。我们都莫名其妙，不知吉老师葫芦里卖的什么药。蛋那么脆，铁锤那么硬，一碰就碎了，这明明是不可能的事儿嘛。哼！吉老师就等着出洋相吧！
吉老师从桌子里拿出一个桔黄色的塑料袋，小心翼翼地从塑料袋里拿出一把锤子，又拿出一个鸡蛋。我仔细看了看：嗯，铁锤不是橡皮泥捏的；鸡蛋也不是什么高科技产品，跟普通的鸡蛋没啥两样。吉老师握着锤子朝我们晃了晃，吓得我们把身子使劲往后仰。接着，她把一张大手帕铺在桌上，把鸡蛋放了上去。说锤就锤。只见吉老师把铁锤高高抡起，好像要使出全身的劲似的，我们都为那鸡蛋捏了一把汗，胆战心惊地注视着吉老师手中的锤子。锤子落了下来，却在半空中停住了——是个假动作！我长吁了一口气。一会，吉老师又把锤子抡起来，我们的心又差点跳到嗓子眼了！铁锤慢慢地下落，这时，应玄池以高分贝的声音大喊道：“啊！——”但铁锤却在离鸡蛋几毫米处忽然停住了——又是一个假动作！吉老师还够会折腾人的呢，害得我的心脏差点每秒钟跳80次！一会，吉老师再次高高抡起锤子——只不过锤子在离鸡蛋几厘米的上空晃了一晃，没有前两次那么夸张罢了。然后对着鸡蛋轻轻一敲，随着 “啪”的一声脆响，鸡蛋碎了，蛋壳裂成两半，蛋黄、蛋清洒了一手帕。我望着那可怜的小鸡蛋，心中升起了一丝怜悯。“哈哈，出洋相啦！”有的同学幸灾乐祸地说，有的同学则提出了反驳的意见。
正在大家争论不休的时候，段卓然揭开了谜底：原来“铁锤锤蛋锤不破”是指“铁锤锤蛋锤子不破”。啊，原来如此！我们茅塞顿开。吉老师的教学方法真巧妙！——她让我们在轻松愉快的“游戏”中去体会中国文字的奥妙：一句话可能有多种意思，理解一句话一定要多方面、多角度地去想，千万不能粗心大意！
英国一家信托机构于近日刊登招聘广告，招聘一名牛仔，男女不限。据了解，共有36人参加应聘。通过面试和骑马测试后，霍索恩・思韦特击败其他应聘者，成为英国200年来首位女牛仔。
800万平方米
沙特阿拉伯正在兴建全球最大的女子学校，规划中校园面积为800万平方米，可容纳4万名学生。据悉，这座大学坐落在沙特首都利雅德市郊，预计2010年建成。校园内将有一座图书馆、多处会议中心、15个院系、多处实验室和一个拥有700个床位的医院。沙特政府官员支持学校推行绿色环保的理念，大约4万平方米的太阳能板发电后将向学校提供16％的取暖电力和18％的空调所需电力。
4 000个
由于受到全球金融危机的影响，企业纷纷“瘦身”，大幅缩减招聘人数，大学毕业生面临“僧多粥少”的局面。2008年11月15日，大连人才招聘会共提供职位约4 000个，进场应聘的大学各层次毕业生却有4万余人。
150米
阿联酋迪拜的工程师们日前宣布将打造世界上最高的喷泉。这座喷泉计划位于迪拜塔人工湖附近，喷泉的底座长275米，相当于两个足球场的长度。该喷泉将在2009年竣工，届时喷泉可以将22 000加仑（约83 000升，美制）的水推送到150米的空中，接近50层楼高，被认为是世界上喷水最高的喷泉。另外，为了让喷泉喷射的水柱更加绚丽多彩，工程人员使用了6 600多处灯光；同时水柱还会随着音乐的变化而发生改变。一旦竣工，该喷泉将成为迪拜又一标志性的景观，预计每年将吸引1 000万名国际游客。
158克
近日，日本一所高中饲养的母鸡产下一枚个头超大的蛋。鸡蛋长8.1厘米，重158克。这所学校饲养了大约480只母鸡，所产鸡蛋颇受附近主妇青睐，但大多为中型鸡蛋，如此巨蛋前所未有。老师把蛋壳敲破倒入盘中后看到，除蛋黄和蛋白外，蛋中居然还有一个中型鸡蛋。
3秒钟
2008年11月16日，在美国的亚利桑那州，200名跳伞者打破了一项吉尼斯世界纪录――跳伞者从2万英尺（约6 000米）的高空跳下，在空中摆出德国国旗的造型并保持了3秒钟。此前的纪录是2006年由156名德国人创造的。
鸡蛋撞地球比赛
今天是星期五，学校举办了第一届鸡蛋撞地球比赛，这次比赛可以说是既活动了身体又活动了头脑让我们从小就热爱科学喜欢科学。这次比赛是一次有意思锻炼，比赛是这样的：有一人从20米的高空往下扔一枚鸡蛋，使鸡蛋不破碎，可以用外包装对鸡蛋进行加工，最后谁的外包装轻并且鸡蛋不损坏，谁就获胜了！
首先出场的是6.3班他们采用了降落伞的原理把鸡蛋放在一个纸杯里，再给纸杯绑上降落伞就可以了，他们投了三次，全部成功，最终称重他们的外包装是65克。不知不觉到我们班了，他们采用了三角形，做出了一个三角体把鸡蛋悬在中间，她们投了两次都成功了，称
重后外包装是35克，太了不起了！这次比赛教育我们只有平常多细心观察才到用时发挥更多哦!这次的比赛又愉悦身心，又开发大脑希望学校以后多举办此类比赛！
鸡蛋季节性特征明显
鸡蛋供应存在一定的季节性，季节对产蛋量的影响主要体现在温度和湿度上。春季天气逐渐变暖，是产蛋最适合季节，进入产蛋旺季，鸡蛋供应量增加；夏季天气炎热，影响蛋鸡产蛋率，进入产蛋淡季，鸡蛋供应量减少。
鸡蛋需求也存在一定的季节性，夏季人们饮食偏清淡，对鸡蛋替代品猪牛羊肉的消费减少，鸡蛋需求增多，冬季消费量相对减少。另外，每年的春节、中秋、国庆、端午等传统节日，无论是鲜蛋的直接消费还是加工需求都会显著上升。
受供需因素影响，鸡蛋价格的季节性走势较为明显：受蛋鸡产蛋率低、中秋国庆双节提振，年内价格最高点一般在8、9月份显现；在春节需求拉动下，年内次高点一般在1、2月份显现；4、5月份受供应增加影响，一般会出现年内价格低点。
节后现货将出现季节性回调
从历史数据来看，2014年鸡蛋现货最高点出现在8月26日，现货价格为5.55元/斤，而中秋节为9月8日，现货价格为5.18元/斤，节后回落至5.04元/斤；2013年鸡蛋现货最高点出现在9月9日，现货价格为4.67元/斤，而中秋节为9月19日，现货价格为4.18元/斤，节后回落至3.75元/斤；2012年鸡蛋现货最高点出现在9月14日，现货价格为4.6元/斤，而中秋节为9月30日，现货价格为4.36元/斤，节后回落至3.98元/斤。
从以上数据可以看出，鸡蛋现货最高点一般出现在节前半个月左右，中秋节价格一般较最高点回落0.3元/斤左右。从鸡蛋期货1509合约的交割规则来看，鸡蛋期货是在节前一周左右交割，交割日前后的现货价格可能较高。若今年主产区鸡蛋现货最高价达到4.2元/斤，则交割前后的现货价格可能为4.1元/斤左右。1509合约进入交割前的合理价格约为4300元/500千克，从该角度看，鸡蛋1509合约较1601合约更为抗跌。
鸡蛋供应仍在增加
监测数据显示，2015年7月，在产蛋鸡存栏量为11.48亿只，较6月增加1.08%，同比增加1.6%；从规模来看，5万只以下规模蛋鸡养殖户在产蛋鸡存栏量增加，5万只以上规模蛋鸡养殖户在产蛋鸡存栏量减少。
从蛋龄结构来看，2015年7月，鸡龄结构呈现“中间高两头低的特点”，后备鸡占比为24.44%，减少0.32%，其中0-30天的小鸡占比减少明显，而90-120天的小鸡占比则增加明显，而450天以上即将淘汰的老鸡占比仅为6.54%，相比6月份增加0.12%。
养殖成本处于偏低水平
【关键词】分散蛋白；牙菌斑；牙周病；细胞外多糖；生物膜分散；抗微生物膜药剂
【中图分类号】Q55
【文献标志码】A
生物膜是细菌在不利于自身生存的环境条件下黏附于物体或活性组织表面并被自身产生的细胞外多糖（extracellular polysaccharide，EPS）所包裹形成的一种与浮游细菌生长方式截然不同的微菌落，是细菌适应生存环境所形成的特殊结构。65％的人类细菌感染性疾病与生物膜形成有关，即生物膜是龋病和牙周病这两大口腔高发疾病的始动因素。生物膜一旦形成，细菌可对抗生素产生高度的耐药性，而这一高度的耐药性与EPS的多网状屏障结构密切相关。细菌释放的毒性成分刺激机体产生大量的特异性抗体及细胞因子，而EPS阻挡了这些免疫成分渗入生物膜，使其在感染局部形成免疫复合物，损伤周围组织，加重炎症破坏；因此，寻找一种可阻断EPS形成或者可降解EPS、破坏生物膜结构的新型药物的研究则备受关注。分散蛋白（dispersin，Dsp）B是一种近年来在牙周可疑致病菌伴放线嗜血杆菌生物膜中发现的具有降解EPS功能的β－己糖苷酶，本文就其最新的研究作一综述。
1 分散蛋白B
伴放线嗜血杆菌是一种与侵袭性牙周炎密切相关的牙周可疑致病菌，其所形成的附着稳固的菌斑生物膜，可抵抗洗涤剂、蛋白酶、热和超声等的清除作用；然而在生物膜主体结构附近，会逐渐形成新的非对称性和分散的独立菌落克隆。Kaplan等发现，成熟的伴放线嗜血杆菌菌斑生物膜向外释放的单独或成簇的细菌，牢固地附着在新的位点并形成新的菌落，从而促进生物膜的整体扩散。他们用其临床野生株CU1000N与同源变异株JK1002／JK1017／JK1022／JK1023进行比较发现，变异株可形成附着性生物膜，但却不能向周围递质中释放细菌。相关变异位点基因为rmlA、wzt、dspA和dspB，编码蛋白形成伴放线嗜血杆菌的O多糖（O polysaccharide，O-PS）成分。应用重组质粒使rmlA、wzt、dspA和dspB基因在变异株中再次表达时，即可恢复合成O-PS、释放细菌和形成新生物膜的功能。这就提示，O-PS是伴放线嗜血杆菌成熟菌斑生物膜分散释放细菌的关键性因素。
有研究者将纯化了的dspB基因表达产物DspB蛋白加入培养基后，可以使JK1023变异株形成的生物膜恢复释放细菌的能力，DspB蛋白的这种作用不仅局限于伴放线嗜血杆菌生物膜，而且还对其他一些产聚-N-乙酰氨基葡糖（poly-N-acetylglucosamine，PGA）细菌的生物膜同样有效，如革兰阳性菌（葡萄球菌属）和革兰阴性菌（胸膜肺炎防线杆菌、大肠埃希菌、鼠疫杆菌、假单胞菌属）。尽管其他细菌，例如路邓葡萄球菌等的基因组中存在与伴放线嗜血杆菌dspB同源的基因，但目前尚未发现这些细菌可产生具有DspB功能的蛋白质。
2 分散蛋白B的结构和作用机制
2.1DspB的结构
DspB为一种相对分子质量4.0×104、包含361个氨基酸的可溶性β-PGA酶，可在一个较窄的pH范围内保持高度活性及稳定性。与人类及其他细菌的β-己糖胺酶相比较，DspB的结构相对简单，仅包含一个单链的结构域；但与α-螺旋或β-链折叠所形成的经典桶装结构不同，此单链结构域可进一步分为许多亚结构。DspB主要的亚结构1～60残基和91～358残基与糖基水解酶家族（glycoside hydrolase family，GHF）-20其他成员催化域的折叠相一致，提示DspB属于GHF-20。
尽管DspB与GHF-20其他成员的结构相似，但两者活性位点的各基团位置和构象却有明显的差异，因此在底物特异性、结合和水解以及产物的释放过程中存在着异同。DspB的作用底物为β-（1，6）-连接-PGA多聚体，GHF-20家族的β-己糖胺酶其他成员的作用底物则为β-（1，4）-连接-PGA多聚体。根据水解酶新命名法则，DspB的底物结合位点可分成+1还原端亚位点和-1非还原端亚位点。Kerrigan等通过对DspB晶体结构进行建模和生化分析发现，精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸和酪氨酸以及色氨酸（tryptophan，Trp）216、Trp237和Trp330组成了-1亚位点，参与了催化反应和或底物结合的过程。
Manuel等在用位点定向突变技术探讨DspB中活性位点的作用机制时发现，DspB是以一种底物辅助机制发挥作用的，即其外切酶的活性作用可使底物末端PGA残基从非还原端释放出来。DspB的活性位点包含三个高度保守的酸性残基，一些芳香族残基和一个精氨酸。通过比较DspB完整蛋白质和不同活性位点缺陷蛋白质的功能发现：1）高度保守酸性基团D183、E184和E332，在催化反应中参与糖苷键的裂解和中间产物的生成；2）芳香族基团Y187、Y278和W237可能参与到与底物的特异性结合，Y187和PGA之间氢键的相互作用有助其稳定过渡；3）E332和精氨酸位点R27可在水解过程中结合PGA末端，参与其稳定过渡。
2.2DspB的作用机制
Izano等通过比较伴放线嗜血杆菌临床野生株CU1000N与O-PS变异株菌斑生物膜形成不同阶段的结构形态时发现：CU1000N生物膜在成熟过程中逐渐形成菌落内部的空腔，生物膜空腔中充满非聚集的浮游细胞；生物膜外层细胞高度聚集，靠近空腔或空腔内为结构松散的非聚集型细胞；当空腔逐渐接近生物膜表层可导致生物膜破溃，悬浮细菌随即释放到周围递质中，形成新的生物膜菌落，引起生物膜分散。缺乏产生DspB能力的伴放线嗜血杆菌O-PS变异菌株形成的生物膜，虽然在形状和大小上与野生菌株生物膜相似，但其内部缺乏充满非聚集浮游细胞的空腔，从而丧失了生物膜分散的能力。这就提示，DspB在生物膜菌落内部非聚集浮游细胞的产生中起重要的作用，而氧张力、pH、温度或菌落中营养成分等菌落内部微环境的改变，是诱发dspB基因表达的可能因素。
DspB形成伴放线嗜血杆菌菌斑生物膜内部空腔的原因之一，在于DspB降解生物膜基质中的EPS，使其以一种主动分散生物膜的方式发挥作用。EPS的大量合成是菌斑生物膜进入成熟阶段的标志，EPS占生物膜总体积分数的90％以上，可介导生物膜内细菌的表面附着和细胞间相互黏附，保护生物膜细胞逃避宿主的先天免疫防御，如细胞吞噬和抗菌肽的清除作用。DspB为一种可溶性β-PGA酶，可以特异性地水解β-（1，6）-PGA多聚体，降解伴放线嗜血杆菌EPS重要的组成成分PGA及其残基，从而致生物膜形成空腔样结构。根据细菌种属差异，EPS可以分为细胞连接多糖β-1，6-PGA多聚体和表多糖细胞间黏附素（exopolysaccharide intercellular adhesin，PIA），可形成PGA多聚体或PIA的菌种有大肠埃希菌、变异链球菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌和幽门螺杆菌等。大肠埃希菌等编码合成PGA所需的基因为pgaABCD，葡萄球菌属合成的PIA取决于icaABC基因。比对和分析二者的基因序列和基因产物的结构显示：pga和ica基因具有明显的同源性；大肠埃希菌pgaC基因、伴放线嗜血杆菌pgaC和表皮葡萄球菌icaA基因的编码产物氨基已糖表聚糖结构异常相近，均为DspB的降解底物；胸膜肺炎嗜血杆菌的pgaABCD基因序列与伴放线嗜血杆菌合成EPS的基因簇同源。这就提示，DspB可能具有降解破坏其他可合成PGA和或PIA细菌生物膜EPS的功能。
DspB形成伴放线嗜血杆菌菌斑生物膜内部空腔的另一个原因，在于DspB可能具有降解Ⅳ型菌毛的能力。伴放线嗜血杆菌致病的关键因素之一，是其特征性结构菌毛对组织的黏附作用。其菌毛的主要亚单位菌毛相关蛋白（fibril-associated protein，Fap）-1由fap-1基因编码，单个的菌毛亚单位呈规则的螺旋结构，与Ⅳ型菌毛结构相似。Fap-1蛋白位点的变异可导致细菌不能产生菌毛或其黏附能力丧失。Fap-1蛋白包含阳性N端前导序列以及螺旋状的疏水N-末端和C-末端变化区域，其中C-末端变化区域对菌毛的成束和附着能力非常重要。Fap-1蛋白存在翻译后修饰，可能主要为糖基化作用，即糖基化其C-末端的7个在黏附中起重要作用的丝氨酸和天冬酰胺。研究推测，Fap-1蛋白的糖基化可能有PGA的参与，而且DspB可能通过裂解Fap-1蛋白中的PGA来改变细菌菌毛的黏附特性，从而导致菌斑生物膜中细菌从凝集状态转化为单个悬浮状态。
3 分散蛋白B的应用
自然界中99％的细菌以生物膜的形式存在，菌斑生物膜的复杂结构增加了致病菌对抗生素的抵抗作用，是导致慢性感染性疾病治疗失败的重要原因。DspB作为一种生物膜重要的组分EPS的降解酶，具有干扰生物膜完整结构的形成，促进抗生素深入生物膜内部的重要的临床应用价值，因此其一经发现立刻引起了学者们的关注。
3.1DspB可促进生物膜的分离
DspB可抑制多种细菌生物膜的形成或促进生物膜从附着材料的表面分离。猪胸膜肺炎放线杆菌为一种人畜共存性致病菌，其产生的毒素可导致肺部组织的严重损伤。PGA对于猪胸膜肺炎放线杆菌生物膜的形成和成熟非常重要。Izano等发现：在含猪胸膜肺炎放线杆菌的培养基中加入20mg·L-1的DspB，可完全抑制其生物膜的形成；而在已经形成24h的成熟生物膜中加入同样质量浓度的DspB，仅需2min即可以造成生物膜从培养板底部脱落。Kaplan等同样发现：在不影响细菌活性的情况下，DspB可以导致4株表皮葡萄球菌成熟生物膜从附着材料的表面脱落；即便在40μg·L-1较低的质量浓度条件下，DspB仍可导致50％以上的生物膜从附着材料的表面脱落。
Chaignon等在分别对比了DspB对表皮葡萄球菌5、444、RP62A，里昂葡萄球菌47，金黄色葡萄球菌383等葡萄球菌属细菌生物膜的分离作用后发现，DspB可有效地破坏具有PGA合成能力的表皮葡萄球菌细菌生物膜，而对缺乏PGA合成能力的里昂葡萄球菌47和金黄色葡萄球菌383的生物膜无破坏作用，证实DspB主要依靠降解PGA来造成对表皮葡萄球菌生物膜的破坏。Ka-plan等发现，DspB不仅可以促进伴放线嗜血杆菌生物膜的分离，还可抑制细菌的自凝集。这就提示DspB在降解PGA和破坏伴放线嗜血杆菌生物膜的同时，还可进一步阻止浮游状细菌的再聚集，减缓生物膜的再次形成。
3.2DspB增加生物膜对抗菌物质的敏感性
DspB可使细菌生物膜对抗菌素的敏感性增加。Izano等联合应用DspB和氨苄西林处理猪胸膜肺炎放线杆菌生物膜，4h后测量其菌落生成单位（colony-forming unit，CFU）发现：在DspB存在时，其CFU下降2.5个对数单位；而单纯以氨苄西林处理其生物膜，其CFU仅下降1.5个对数单位。Donelli等发现，DspB可增加头孢孟多酯钠对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的杀菌活性。Lee等则证实：20mg·L-1的DspB和50mg·L-1的利福平共同作用于微流体设备上的表皮葡萄球菌生物膜，可将其完全消除；而单独应用DspB或利福平，则不能完全消除其生物膜。这就提示，DspB在发挥其抗微生物膜作用的同时也可改变抗生素向菌落中扩散的能力，促进抗生素到达作用靶点。
DspB也可增加生物膜对某些化学成分的敏感性。阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，SDS）对多种口腔细菌具有杀菌作用，可以穿透细胞质膜导致细菌胞体溶解，SDS对浮游伴放线嗜血杆菌的最小抑菌质量分数为0.01％。Izano等发现，单独应用质量分数0.01％的SDS不能明显地破坏伴放线嗜血杆菌生物膜，而细菌生物膜经DspB预处理后，SDS可以使其CFU数量明显下降。Izano等发现，经DspB预处理的表皮葡萄球菌生物膜对阳离子去污剂西砒氯铵的敏感性明显增加，然而DspB却对表皮葡萄球菌浮游细胞无类似的作用。这就表明，DspB能使生物膜对抗菌物质的敏感性增加，而其自身无抗菌作用。Darouiche等将DspB和三氯生包被的导管植入试验兔的皮下，接种金黄色葡萄球菌到导管的表面，结果细菌的定植率从未包被组的97％下降到包被组的3％，两者的协同作用表明，DspB增加了生物膜定植菌对三氯生的敏感性。综上所述，联合应用抗菌物质和非细胞毒性的DspB可为口腔疾病和各种医疗器械相关感染性疾病提供新的治疗方案。
3.3DspB的初期临床研究
由于生物膜的抗生素耐药性使传统抗微生物药物的应用受到了一定的限制，因此，Lu等构建了一种既有溶菌作用又能表达生物膜降解酶DspB的细菌噬菌体，这种表达DspB的噬菌体相对于无DspB酶活性的噬菌体能更有效地清除大肠埃希菌生物膜。该研究提示，DspB与细菌噬菌体的结合可为医疗领域提供控制细菌生物膜感染的新思路。
Darouiche等发现，DspB和三氯生的协同作用可有效地控制由金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和白色假丝酵母菌等病原菌导致的中心静脉导管感染，二者协同具有更强的抗菌和抗微生物膜效用。DspB-三氯生创口凝胶对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等创伤相关微生物有更持久的抗菌活性，其抗菌和抗生物膜的特性使之在创口敷料和皮肤护理等产品中具有潜在的应用价值。
鉴于DspB巨大的临床应用前景，目前部分学者或者公司已经开始研发DspB的有效生产途径，并取得了一定的进展。Yakandawala等设计并构建了缺乏腺嘌呤－胞嘧啶－腺嘌呤（adenine-cytosine-adenine，ACA）的dspB基因，在大肠埃希菌中合成重组质粒。在T5和T7启动子作用下合成的ACA-缺乏型dspB mRNA表达水平明显高于野生型者，使DspB的表达水平显著增加了34.9％和77.6％。为了进一步快速而有效地测量DspB的表达水平，有研究者构建了可以表达绿色荧光蛋白（green fluorescence protein，GFP）的DspB-GFP融合蛋白重组质粒pT7dspBGFP。目前的研究证实，ACA-缺乏型dspB质粒可有效地增加DspB的表达水平，且绿色荧光信号提高了DspB的定量和标志优势，为DspB的商业化批量生产提供了技术支撑。
【摘要】
目的: 构建pcDNA3.1()/XAPC7真核表达载体并检测其在人肝癌细胞系SMMC7721中的表达。方法: 采用PCR法从pET28b/XAPC7重组质粒中克隆得到XAPC7 cDNA全长序列， 将之与pMD18T载体连接、 测序后将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1()中。构建好的pcDNA3.1()/XAPC7真核表达质粒经酶切鉴定后， 采用脂质体法将该重组质粒转染人肝癌细胞系SMMC7721， 经G418筛选， 得到阳性克隆细胞株， 再应用半定量RTPCR技术检测转染前后该细胞株XAPC7基因的mRNA表达水平。结果: pcDNA3.1()/XAPC7经酶切鉴定及DNA测序证实， 目的基因XAPC7的序列完全正确， 真核表达载体构建成功; 经RTPCR检测， 重组质粒转染株的XAPC7基因mRNA表达水平高于对照组， 证实XAPC7基因已经稳定转染到SMMC7721细胞中并得到表达。结论: 成功地建立了人基因XAPC7的稳定转染细胞株， 为进一步研究XAPC7的功能奠定了实验基础。
【关键词】 真核表达质粒 SMMC 7721 XAPC7 构建 表达
XAPC7基因编码人类蛋白酶体α7亚基（proteasome subunit， alpha type 7）， 该蛋白是20S蛋白酶体核心复合体的一个α亚基。作为蛋白酶体的一个亚基， XAPC7编码产物参与了HBV、 HCV和HIV病毒的复制及多种蛋白质的降解， 并与HBx、 HIF1、 cAbl及Arg等多种肿瘤相关的重要蛋白质相互作用; 同时该蛋白还参与膜蛋白的转运及对蛋白酶体活性的调节等; 此外本基因定位于20q13.33染色体， 既往研究提示人类肿瘤普遍伴随20 q的扩增[1， 2]， 但XAPC7在肿瘤方面的研究目前国内外鲜有报道。为了研究XAPC7编码蛋白在肿瘤发生发展中的作用， 我们构建了重组人XAPC7真核表达质粒， 并将其转染入人肝癌细胞系SMMC7721中， 以便进一步探讨其对肝癌细胞生长、 死亡以及浸润、 转移的影响。
1 材料和方法
1.1 材料 大肠杆菌DH5α和人肝癌细胞系SMMC7721均由本实验室保存。原核重组表达质粒pET28b/XAPC7由上海复旦大学季朝能教授提供。质粒小量抽提试剂盒及凝胶回收试剂盒购自优晶公司。限制性核酸内切酶BamH I、 Xho I、 T4 DNA连接酶、 DNA Mr标准(DL 2000)、 pMD18T载体均购自大连宝生物工程有限公司。阳离子脂质体Lipofectamine2000、 TRIzol试剂、 G418和pcDNA3.1()真核表达载体购自Invitrogen公司。新生牛血清(FBS)购自GibcoBRL公司。
1.2 方法
1.2.1 引物设计 为人XAPC7基因克隆及半定量鉴定之用， 根据GenBank的基因序列(NM_002792)， 应用软件Primer Designer 5.0各设计一对克隆引物及半定量引物。克隆引物: 上游: 5′CTCGAGATGAGCTACGACCGC3′; 下游: 5′GGATCCTGATGCTTTCTTTTGTTTC3′， 在上、 下游引物中分别引入Xho I、 BamH I酶切位点， 扩增大小为747 bp的人XAPC7 cDNA全长序列; 半定量引物: 上游: 5′GCCATCACCGTCTTCTCG3′; 下游 5′GCCCATTGCTCTGCGTAT3′， 扩增片段长度为355 bp。内参照βactin的引物序列为: 上游: 5′TGTGACGTGGACATCCGCAAAG3′; 下游: 5′TGGAAGGTGGACAGCGAGGC3′， 扩增片段为206 bp。所有引物均由Invitrogen公司合成。
1.2.2 目的基因cDNA的获取 以pET28b/XAPC7原核重组表达质粒为模板进行PCR扩增， 反应体系， 质粒模板0.1 μL， 10×ExTaq PCR Buffer 5 μL， dNTP(2.5 mmol/L) 4 μL， 灭菌蒸馏水38.65 μL， TaKaRa ExTaq (5 U/μL) 0.25 μL， 上游引物(20 μmol/L) 1 μL， 下游引物(20 μmol/L) 1 μL; 反应条件: 94℃ 4 min; 94℃ 30 s， 60℃ 30 s， 72℃ 40 s扩增25个循环; 72℃延伸7 min。PCR产物电泳后， 切胶回收目的片段。
1.2.3 T载体克隆 用凝胶回收试剂盒回收纯化PCR产物， 并用pMD18T载体连接试剂盒将目的片段与pMD18T载体连接。连接反应体系为: SolutionI 5 μL， pMD18T DNA 1 μL(约50 ng)， PCR产物 1 μL(约50 ng)， dH2O 3 μL， 置于16℃连接2 h后， 用大肠杆菌DH5α感受态进行转化。随机挑取几个单菌落， 用XAPC7克隆引物进行菌落PCR检测， 将阳性克隆菌落扩大培养， 送至Invitrogen公司测序。测序正确的克隆命名为: pMD18T/XAPC7。
1.2.4 真核表达载体pcDNA3.1()/XAPC7的构建 用BamH I、 Xho I分别双酶切重组pMD18T/XAPC7质粒及pcDNA3.1()空载体， 凝胶电泳后回收目的基因片段， 连接、 转化并挑取单菌落， 用XAPC7克隆引物进行菌落PCR检测， 将阳性克隆菌落扩大培养， 提取重组质粒pcDNA3.1()/XAPC7。
1.2.5 细胞培养 SMMC7721细胞在含100 mL/L新生牛血清的RPMI1640培养液中， 于37℃ 50 mL/L CO2饱和湿度的孵箱中培养。
1.2.6 SMMC7721细胞的基因转染和筛选培养 将处于对数生长期的SMMC7721细胞重悬于完全培养液中， 以3×105个细胞/孔接种于6孔板中， 培养24 h， 使细胞达到80%～90%融合。用脂质体Lipofectamine2000分别介导空质粒及重组质粒转染细胞， 并设空白未转染组作对照（参照说明书）。转染24 h后采用不同浓度G418进行筛选， 以对照组细胞全部死亡时的G418浓度（800 mg/L）作为参照， 2周后G418改为400 mg/L维持筛选。用选择培养液（400 mg/L G418）培养4周后， 分离出存活的抗G418的阳性克隆， 最后用含100 mL/L新生牛血清的选择培养液扩大培养备用。
1.2.7 转染后真核表达的RTPCR鉴定 以βactin为内参照， 采用RTPCR法用半定量引物扩增XAPC7基因， 对转染细胞内目的基因的mRNA表达情况进行鉴定。扩增产物用25 g/L的琼脂糖凝胶电泳观察图像。转染细胞总RNA的提取、 RTPCR的具体操作均按试剂盒说明书进行。
2 结果
2.1 XAPC7目的基因的PCR产物鉴定 经20 g/L琼脂糖凝胶电泳， 在约750 bp处有明亮条带， 与预期目的片段大小一致（图1）。
图1 PCR产物20 g/L琼脂糖凝胶电泳（略）
M: DL 2000 DNA marker; 1: XAPC7.
2.2 T载体克隆的鉴定 目的基因与T载体连接后， 菌液PCR扩增产物经20 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定与目的基因大小相符， 表明所挑选的几个单菌落均为阳性克隆。菌液测序结果示: 装入T载体的序列与GenBank上登录的人XAPC7 cDNA序列比较完全相符。
2.3 真核表达载体的构建与鉴定 将用BamH I、 Xho I双酶切重组质粒pMD18T/XAPC7得到的目的基因插入pcDNA 3.1()空质粒， 获得pcDNA3.1()/XAPC7真核表达质粒， 该质粒再经BamH I、 Xho I双酶切鉴定， 得到了747 bp的目的片段和约5400 bp的载体片段（图2）， 送测序证实该质粒含有完全正确的XAPC7 cDNA序列。
图2 重组质粒pcDNA3.1()/XAPC7双酶切鉴定（略）
M: DL 2000 DNA marker; 1-3: pcDNA3.1()/XAPC7.
2.4 稳定表达株的筛选与鉴定 在6孔板中将pcDNA3.1()/XAPC7质粒转染入人肝癌细胞系SMMC7721， 经4周选择性培养（400 mg/L G418）后， 得到了稳定表达目的基因mRNA的阳性细胞株。筛选后的XAPC7稳定表达细胞经半定量RTPCR方法分析， 结果显示， 转染了pcDNA3.1()/XAPC7的SMMC7721细胞与对照转染空载体及未转染的SMMC7721细胞相比， 三者的βactin表达水平差别不大， 说明RNA总量基本一致。在25个循环内， 转染了pcDNA3.1()/XAPC7的SMMC7721细胞扩增后得到一条大小为355 bp的清晰条带， 而对照转染空载体及未转染的SMMC7721细胞则条带非常弱， 几乎看不到， 说明重组子已成功转入SMMC7721细胞并得到表达(图3)。
图3 各转染组细胞XAPC7基因的mRNA水平变化（略）
M: DL 2000 DNA marker; 1: 空白未转染SMMC7721细胞组; 2: 转染pcDNA3.1()空载体组; 3: 转染pcDNA3.1()/XAPC7组.
3 讨论
人类基因XAPC7(又称C6、 HSPC或RC61)编码人类蛋白酶体α7亚基PSMA7。其编码成员属于肽酶a T1A家族， 是蛋白酶体20S核心结构的α亚基。1996年Huang等[3]以HBX为探针， 采用双酵母杂交法筛选HeLa细胞的cDNA文库， 获得了XAPC7的cDNA， 并将其命名为XAPC7。含248个氨基酸的XAPC7与HC8(PSMA3)有33%的一致性， 并与果蝇的蛋白酶体亚基有高度的同源性。
研究表明XAPC7可通过与HBx、 HIF1、 cAbl及Arg等蛋白相互作用， 参与病毒复制、 蛋白酶体及转录因子的活性调控。有作者[4]研究证实， XAPC7可与HBx相互作用。HBx与XAPC7的相互作用是病毒复制的关键， HBx可能通过与XAPC7相互作用干扰蛋白酶体复合物的活性， 从而导致HBV病毒的持续感染状态。另有研究报道XAPC7与丙肝病毒内部核蛋白体进入位点的活化调节(IRES)有关[5]， 并在控制丙肝病毒翻译和下游的复制中发挥重要作用。同时有研究[6]提示HIF1α是XAPC7的细胞靶标。XAPC7通过与HIF1α的转录抑制区结合， 将底物HIF1α募集至蛋白酶体复合物中， 促进其转录子的非氧依赖性蛋白酶体途径的降解， 从而抑制HIF1α的转录。可见XAPC7在HIF1的活性调节中发挥重要作用。Liu等[7]则发现cAbl和Arg的SH2区域可通过与XAPC7结合而使其磷酸化，进而调节蛋白酶体介导的蛋白质的降解活性。表达磷酸化突变的XAPC7细胞将出现G1/S过渡和S/G2进展受损， 氧化应激和电离照射可导致cAblXAPC7复合物和磷酸化XAPC7的形成增加。可见， cAbl和Arg介导的XAPC7的磷酸酪氨酸修饰调控着26S和20S蛋白酶体的活性。
尽管XAPC7参与多种重要的肿瘤相关蛋白的表达及活性调节（如HBx、 HIF1、 cAbl及Arg）， 但其本身在肿瘤的发生、 侵袭及迁移中究竟起怎样的作用？ 在肿瘤的发生中， XAPC7是作为这些重要肿瘤相关蛋白的上游调控因子， 还是仅作为蛋白质降解的“垃圾处理站”而接受其他因子的调控？ Shi等[8]采用SEREX技术在cDNA表达文库中筛选到PSMA7阳性克隆， 进一步的表达谱芯片表明PSMA7在HCC样本中呈现表达上调， 实时定量RTPCR结果16个配对原发性肝细胞癌标本和癌旁非肿瘤组织标本中有7个在肿瘤组织中高表达（44%）， 初步提示PSMA7是一个原发性肝细胞癌的肿瘤相关抗原。但PSMA7在肝癌中究竟充当何种角色目前尚不清楚。为此， 本实验中成功构建了能在人肝癌细胞系SMMC7721中表达的人XAPC7基因真核表达载体， 为进一步研究XAPC7基因对肿瘤细胞生物学功能的影响奠定了实验基础。同时本课题组正在制备抗XAPC7 mAb， 并构建RNA干扰重组质粒， 从细胞增殖、 细胞周期、 细胞凋亡及对肿瘤细胞的侵袭迁移的影响等多方面考察本基因及其编码蛋白的功能。
致谢: 感谢上海复旦大学生命学院遗传所季朝能教授对本课题的协助和支持！
参考文献
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[2] ElRifai W， Frierson Jr HF， Moskaluk CA， et al. Genetic differences between adenocarcinomas arising in Barrett’s esophagus and gastric mucosa[J]. Gastroenterology， 2001， 121(3): 592-598.
[3] Huang J， Kwong J， Sun ECY， et al. Proteasome complex as a potential cellular target of hepatitis B virus X protein[J]. J Virol， 1996， 70(8): 5582-5591.
[4] Zhang Z， Torii N， Furusaka A， et al. Structural and functional characterization of interaction between hepatitis B virus X protein and the proteasome complex[J]. J Biol Chem， 2000， 275(20): 15157-15165.
[5] Kruger M， Beger C， Welch PJ， et al. Involvement of proteasome alphasubunit PSMA7 in hepatitis C virus internal ribosome entry sitemediated translation[J]. Mol Cell Biol， 2001， 21(24): 8357-8364.
[6] Cho S， Choi YJ， Kim JM， et al. Binding and regulation of HIF1α by a subunit of the proteasome complex， PSMA7[J]. FEBS Lett， 2001， 498(1): 62-66.
