作者：王淑辉; 王薇; 张海廷; 程杉; 尚延昌; 张...骨髓间充质干细胞wnt3a胆碱能神经元阿尔茨海默病
摘要：目的 探讨经典Wnt/β-catenin通路对大鼠MSCs在体外分化为神经元和胆碱能神经元的调节作用。方法 取SD大鼠股骨和胫骨的骨髓,利用差速贴壁法分离、扩增及纯化MSCs,绘制生长曲线; 应用免疫荧光和Western-Blot的方法检测Wnt3a处理后β-catenin蛋白的分布变化; 取第4代MSCs分为3组; A组为空白对照组,用空白DMEM培养基培养细胞; B组为诱导分化对照组,用含100 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast grown factor, bFGF）、5 umol/L维甲酸（retinoic acid, RA）的DMEM诱导培养基培养细胞; C组为Wnt3a诱导分化组,在上述诱导培养基中加入50 ng/mL Wnt3a培养细胞; 用形态学观察和Western-Blot的方法比较各组对MSCs向神经元及胆碱能神经元分化的影响; 应用形态学观察和Western-Blot的方法比较各组对MSCs向神经元及胆碱能神经元分化的影响。结果 利用差速贴壁法细胞传至P3代时形态趋于一致,呈均匀分布生长。P3代细胞的生长曲线显示,接种后的第1、2 d细胞处于潜伏期; 第3、4 d细胞进入对数生长期; 第5 d进入平台期。P4代细胞高度表达CD29和CD44（阳性率分别为99.9%和73.2%）。Wnt3a处理组细胞的β-catenin在细胞核的分布较对照组细胞显著增多（P〈0.01）。诱导分化细胞组中A组细胞可检测到少量神经元的标记物,但未检测到胆碱能神经元的标志物,B组和C组细胞均可检测到神经元和胆碱能神经元的标志物,B组和C组分化为神经元的比例较A组显著增高（P〈0.01）; C组分化为胆碱能神经元的比例较B组显著增高（P〈0.01）。结论 Wnt3a能够促进MSCs内的β-catenin的核转移激活经典Wnt信号通路,促进体外培养的MSCs向胆碱能神经元分化。
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