作者：丁志刚; 张旻; 姜亚平; 卜碧涛; 王雪贞cdk5小干扰rna腺相关病毒基因治疗神经变性
摘要：目的构建能表达CDK5特异性小干扰RNA（siRNA）（cdk5-siRNA）的重组腺相关病毒（AAV）载体，体外观察其对CDK5基因的沉默作用。方法采用基因克隆技术将合成的特异性cdk5RNA干扰寡核苷酸序列克隆至AAV Helper-Free System中的表达质粒pAAVMCS，构建出质粒pAAVM cscdk5-siRNA，通过酶切测序鉴定重组质粒；将该质粒与系统中的控制质粒pAAVRC、辅助质粒pHelper用磷酸钙法共转染HEK293细胞，包装得到表达cdk5-siRNA的重组腺相关病毒载体（rAAV-cdk5-siRNA）；用斑点杂交法测定重组病毒的滴度，重组病毒感染体外培养的PCI2细胞，Western blot检测其抑制cdk5表达的效果。结果成功构建并包装出重组腺相关病毒载体rAAVcdk5-siRNA，病毒滴度达4×10^13／ml，重组病毒感染后的PC12细胞cdk5表达明显下调。结论构建的重组腺相关病毒载体rAAV—cdk5-siRNA能明显干扰cdk5的表达，为将其进一步应用于神经变性疾病的治疗研究奠定了基础。
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