作者：吉元刚; 张国利; 李泽鸿; 岳玉环; 吴广谋...重组蛋白表达蛋白纯化亲和常数乙酰胆碱
摘要：以克隆表达的B型肉毒毒素轻链蛋白（Bo NT/BL）为抗原,从噬菌体抗体库Tomlinson I＋J筛选出得到活性高和特异性高的全人源单链抗体（Sc Fv）,结合能够携带外源蛋白有效通过生物膜的小片段跨膜肽（TAT）制备跨膜单链抗体（TAT-Sc Fv）。经PCR后酶切,克隆到原核表达载体（p ET-28a-TAT）中,构建含有跨膜肽（TAT）的抗B型肉毒毒素胞内抗体融合蛋白,并在大肠杆菌中诱导表达,进行纯化工艺,对产物进行浓度纯度、亲和常数测定及生物活性研究。成功构建TAT-Sc Fv表达载体,融合蛋白相对分子量为32.7 k Da,主要以可溶形式表达,纯度也达到95%以上,胞内抗体中和B型肉毒毒素致病轻链得到TAT-Sc Fv的亲和常数为（1.133±0.273）×10^6L/mol,小鼠神经细胞乙酰胆碱定量测定实验证明胞内抗体具有较好的抗毒素活性。此结果为B型肉毒毒素治疗性胞内抗体的研制和肉毒中毒治疗奠定了基础。
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