作者：张瑞萍; 邱相君; 苏兵; 郑路路间质干细胞骨髓骨形态发生蛋白质2转染头蛋白
摘要：目的:观察头蛋白shRNA和骨形态发生蛋白2(bonemorphogeneticprotein2,BMP-2)的协同作用对骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)成骨能力的影响。方法:分离、培养兔BMSCs,分为头蛋白shRNA基因干扰组、BMP-2过表达组、双基因转染组。构建慢病毒头蛋白shRNA干扰载体和BMP-2过表达载体。头蛋白shRNA基因干扰组、BMP-2过表达组分别加入头蛋白shRNA基因干扰载体和BMP-2过表达载体,双基因转染组同时加入头蛋白shRNA基因干扰载体和BMP-2过表达载体,进行基因转染。基因转染成功后,采用荧光定量PCR检测3组BMSCs中头蛋白和BMP-2的mRNA相对表达量,采用茜素红染色和碱性磷酸酶染色检测3组BMSCs的诱导成骨能力。结果:①细胞培养和基因转染鉴定结果。流式细胞仪检测第2代培养细胞,CD44和CD29表达分别为61.3%和57.2%,CD34和CD45表达分别为3.6%和2.4%,符合BMSCs表型特征。基因转染72h后,3组BMSCs的转染率为(92.5±2.5)%,基因转染成功。②头蛋白和BMP-2mRNA表达检测结果。基因转染成功后,3组细胞中头蛋白mRNA相对表达量的组间总体比较,差异有统计学意义(0.343±0.124,1.040±0.269,0.123±0.057;F=22.390,P=0.002);BMP-2过表达组较头蛋白shRNA基因干扰组和双基因转染组高(P=0.016,P=0.005),头蛋白shRNA基因干扰组和双基因转染组的组间差异无统计学意义(P=0.054)。3组细胞中BMP-2mRNA相对表达量的组间总体比较,差异有统计学意义(1.120±0.363,3.667±0.431,4.833±0.475;F=59.680,P=0.000)。双基因转染组较头蛋白shRNA基因干扰组和BMP-2过表达组高(P=0.000,P=0.035),BMP-2过表达组高于头蛋白shRNA基因干扰组(P=0.001)。③茜素红和碱性磷酸酶染色结果。茜素红染色可见胞浆边缘呈现不透光的矿化结节。3组细胞茜素红染色阳性率的组间总体比较,差异有统计学意义[(62.317±3.969)%,(39.267±2.170)%,(72.320±4.133)%,F=68.870,P=0.000];双基因转染组高于头蛋白shRNA�
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