作者：李晋玉; 俞兴; 姜俊杰; 赵学千; 孙旗; 郑...骨碎补黄酮细胞增殖血管内皮细胞成骨细胞共同培养技术羟基磷灰石类胶原内皮生长因子成纤维细胞生长因子2组织工程
摘要：目的:探讨骨碎补总黄酮(osteopractic total flavone,OTF)对纳米羟基磷灰石-胶原(nano-hydroxyapatite collagen,nHAC)复合材料与成骨细胞-血管内皮细胞共培养体系中血管内皮细胞增殖的影响。方法:分别以浓度为500 μg·mL^-1 、250 μg·mL ^-1 、100 μg·mL^-1 、50 μg·mL ^-1 及0 μg·mL^-1 的OTF溶液干预生长在nHAC复合材料上的hFOB1.19人成骨细胞,干预24 h后收集5种上清液。再分别以5种上清液和人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)培养基混合培养HUVEC,培养24 h和48 h后进行划痕实验,计算细胞迁移率,确定OTF溶液最佳干预浓度和时间。在4个培养皿中铺满nHAC复合材料,加入DMEM/F12。A培养皿中不添加其他材料;B、D培养皿中接种hFOB1.19人成骨细胞,预培养24 h使细胞贴壁;C、D培养皿中加入OTF溶液,根据上一步划痕实验确定的最佳干预浓度和时间进行干预。干预结束后收集各培养皿中的上清液进行后续实验。接种HUVEC于HUVEC培养基上,分为空白组和A、B、C、D共5组;空白组不添加其他材料,A、B、C、D组分别加入A、B、C、D培养皿上清液;以CCK-8法测定细胞增殖率,HE染色后观察HUVEC形态,以ELISA法检测血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)含量。结果:①OTF溶液最佳干预浓度与时间检测结果。5种浓度OTF溶液干预后,0~24 h细胞迁移率的差异有统计学意义[(16.46±4.01)%,(21.71± 1.30)%,(24.94±3.47)%,(22.08±2.46)%,(21.34±2.28)%, F=4.564,P =0.013],其中100 μg·mL ^-1 OTF溶液干预后的细胞迁移率高于其余4组( P=0.001,P=0.020,P=0.014,P =0.029);24~48 h细胞迁移率的差异无统计学意义[(6.06± 1.22)%,(5.37±1.85)%,(5.58±1.88)%,(6.14±1.52)%,(4.99±1.25)%, F=0.374,P =0.823]。提示OTF溶液最佳干预浓度为100 μg·mL ^-1 ,最佳干预时间为24 h。②HUVEC细胞活性检测结果。时间因素与分组因
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