作者：丁永利 陈星 赵明明 蔡一强 姜勇微rnas成骨细胞骨形态发生蛋白质2osterix碱性磷酸酶动物实验
摘要：目的：探究miR-133a对骨形态发生蛋白2诱导的鼠前成骨细胞分化的影响及其作用机制。方法：检测骨形态发生蛋白2诱导的鼠前成骨细胞分化过程中miR-133a水平、碱性磷酸酶活性、Runx-2蛋白水平及Osterix蛋白水平，检测转染miR-133a后鼠前成骨细胞分化过程中碱性磷酸酶活性、Runx-2 mRNA水平、Runx-2蛋白水平、Osterix mRNA水平和Osterix蛋白水平。miR-133a测定采用qRT-PCR法，Runx-2和Osterix蛋白水平测定采用Western-blot法，Runx-2和Osterix mRNA水平测定采用RT-PCR法，碱性磷酸酶活性检测采用碱性磷酸酶检测试剂盒。采用HEK293细胞进行miR-133a靶基因验证实验，细胞中荧光值的检测采用荧光素酶报告基因检测系统。结果：miR-133a在骨形态发生蛋白2诱导的MC3T3-E1细胞分化过程中表达显著下调，碱性磷酸酶的活性则显著增高。转染miR-133a后，细胞中碱性磷酸酶活性受到明显抑制，Runx-2蛋白水平显著下调、Runx-2 mRNA水平未发生明显变化，Osterix的mRNA和蛋白水平均明显下调。荧光素酶报告基因检测结果显示，miR-133a可靶向作用于Runx-2 mRNA的3’-UTR区。结论：miR-133a通过抑制Runx-2的蛋白表达进而抑制骨形态发生蛋白2诱导的鼠前成骨细胞分化过程。
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