作者：林才志; 谢海源; 黄振青; 周艳平; 甘尧; ...汗衣台有效成分hbv启动子荧光素酶报告基因重组质粒
摘要：目的:通过汗衣台抗HBV有效成分古伦宾、非洲防己碱对4种HBV启动子的影响研究,进一步探讨汗衣台抑制HBV病毒复制的可能机制。方法:采用CCK8法检测古伦宾、非洲防己碱对Hep G2细胞的增殖毒性,以确定它们的安全浓度;人工合成法、基因扩增法分别构建经典型和突变型的4种HBV启动子(S1p,S2p,Cp,Xp)调控的含荧光素酶报告基因的表达重组质粒(p Cp-Luc,p S1p-Luc,p S2p-Luc,p Xp-Luc),脂质体转染Hep G2细胞8h后,分别加入不同安全浓度的古伦宾、非洲防己碱进行干预处理,于24h、48h结束干预后进行双荧光素酶检测。结果:古伦宾对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(16.4%)、轻度(10.0%)、重度(20.2%,p=0.298)、明显抑制(8.9%,p=0.047);非洲防己碱对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(16.8%)、中度(17.7%)、重度(25.2%,p=0.199)、明显抑制(8.6%,p=0.05);阳性对照干扰素组对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(15.1%)、重度(22.3%)、重度(24.0%)和中度抑制(6.2%);拉米夫定对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为重度(20.7%)、中度(13.4%)、中度(12.1%)和明显抑制(9.9%,p=0.046)。基因扩增法构建的4个HBV启动子S1p,S2p,Cp,Xp分别有1,1,4,4个突变点,突变后的启动子转录效率提高1.3倍~2.2倍(48 h组),但是,药物的抑制效率没有按相应比例提高,从这一角度来看,古伦宾、非洲防己碱、干扰素和拉米夫定对突变启动子的抑制作用除对Xp有明显提高外(2.3倍~3.5倍),对其余突变启动子均无明显变化甚至抑制作用下调(1/10~2/5)。结论:汗衣台抗HBV有效成分古伦宾、非洲防己碱对经典型和突变型的4种HBV启动子Cp,S1p,S2p,Xp均有不同程度的抑制作用,与干扰素和拉米夫定类似。四种药物对Xp尤其是突变型Xp有明显抑制作用,其中以干扰素最显著,提示汗衣台除了通过抑制启动子活性抗HBV以外,可能还通过抑制Xp启动子活性,继而下调X蛋白的表达,从而对HBV相关性肝癌的发
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