作者：肖永贵; Susanne; DREISIGACKER; Claudia...普通小麦dsdna荧光定量显性标记分子育种
摘要：双链DNA （dsDNA）定量分析是植物分子生物学研究的基础, 对基因型分析尤为重要.本研究以λ 噬菌体dsDNA 为标准样品, 建立了荧光定量标准曲线, 探讨荧光核酸定量通量性及其与紫外法定量的差异, 并分析荧光染料在基因分型中的应用.结果表明, 荧光染料能够对dsDNA 进行高效微量定量分析（〈1.1 ng ·L^-1）, 但因鉴定核酸的浓度较低, 对小麦籽粒和叶片全基因组DNA 定量时稀释倍数较大, 易增大浓度误差.降低反应体系量导致标准曲线决定系数降低, 影响测量准确性.精确定量dsDNA 浓度时, 总反应体系应大于200 ·L; 对PCR 产物进行基因分型时,总反应体系应不低于40μL.相同DNA 模板浓度下, FLUOstar 平台可以对抗秆锈病基因显性标记csSr32#1 （Sr32）和IB-267 （Sr50）的PCR 产物进行基因型分型, 判断准确率为100%.对特异性强且等位基因片段差异大（≥100 bp）的共显性标记, 如抗叶锈病基因标记 We173 （Yr26）等, 用荧光染料同样可以进行基因分型.与琼脂糖凝胶电泳相比, 荧光染料鉴定等位基因价格略高, 但方法简单、准确快速、重现性好, 可用于分子育种中世代材料快速筛选.
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