作者：罗兵; 薛丽琰; 朱利泉; 张贺翠; 彭一波; ...甘蓝酵母双杂交
摘要：为深入研究甘蓝S位点受体激酶（SRK）和S位点富含半胱氨酸蛋白（SCR）间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域（eSRK）和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将eSRK与GAL4报告基因DNA活化域融合（pGADT7eSRK）以及SCR与GAL4报告基因DNA结合域融合（pGBKT7SCR）。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活现象。融合的二倍体酵母（pGADT7eSRK×pGBKT7SCR）能在选择性固体培养基（SD/–Ade/–His/–Leu/–Trp/X-a-Gal/AbA）上生长,并且菌落呈蓝色。结果表明,eSRK与SCR蛋白能够相互结合,为深入研究二者作用位点成功建立了一个技术平台。
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