作者：沈厉; 周善璧; 毛旖旎; 林天兰; 岑超; 胡...角膜新生血管人脐静脉内皮细胞akt2
摘要：目的：研究microRNA142（miR-142）对角膜新生血管形成的影响及其相关机制。方法：实验设置空白对照组、阴性对照组、过表达miR-142组以及干扰miR-142组，分别利用miR-142模拟物（mimic）和抑制物（inhibitor）过表达和干扰miR-142；CCK-8增殖实验检测miR-142对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）增殖能力的影响；双荧光素酶报告基因验证AKT2是否为miR-142的直接靶基因：RT—PCR和Western blot实验检测miR-142对AKT2表达水平的影响。结果：CCK-8增殖实验结果显示空白对照组、阴性对照组和过表达miR-142组96h的吸光度（absorbance，A）均值分别为872．21±44．20、842．16±49．54和1407．91土16．58。差异具有统计学意义（F=102．8，P=0．000）。干扰miR-142后HUVECs增殖能力明显减弱（空白对照组=919．69±25．46，阴性对照组=856．76±36．22，干扰miR-142组=602．77±25．62；F=72．8，P=0．000）。双荧光素酶报告基因结果发现过表达miR-142后AKT2表达水平没有明显变化（对照组=0．36，过表达miR-142组=0．46，P=0．147）。RT—PCR结果显示过表达miR-142（0．408±0．046）后AKT2表达水平较阴性对照组（0．173±0．022）升高（辟0．018），干扰miR-142组（0．16±0．02）较阴性对照组（0．362±0．068）明显降低（P=0．037），差异均具有统计学意义。Western blot实验进一步验证了miR-142对AKT2基因的调控作用。进一步研究发现，shRNA干扰AKT2后miR-142促进HUVECs增殖的作用消失，对照组、过表达miR-142组、过表达miR-142＋shRNA—AKT2组和shRNA—AKT2组的96h吸光度值分别为981．80±75．40、1357．81±47．56、806．39±49．70和921．59±40．38，差异具有统计学意义（F=40．97，P=0．000）。结论：miR-142通过上调AKT2的表达促进HUVECs增殖，从而促进角膜新生血管形成。
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