作者：孟小琴; 李云峰; 周毅; 缪怡; 董坚结肠癌上皮间质化迁移与侵袭增殖
摘要：目的：探讨卵巢癌结构域蛋白酶-1（ovarian tumor domain-containing protease-1,OTUD1）基因对人结肠癌细胞HCT116增殖和侵袭的作用及机制。方法：选取低表达OTUD1的人结肠癌细胞株,利用慢病毒包装技术过表达OTUD1基因,空载质粒作对照,嘌呤霉素筛选后构建稳定转染的结肠癌细胞株。RT-PCR（reverse transcription PCR）和Western blot技术检测转染效率。细胞迁移和侵袭实验检测2组细胞迁移和侵袭能力的改变。细胞增殖实验和流式细胞术检测2组细胞增殖能力的变化。克隆形成实验检测2组细胞的克隆形成能力。Western blot技术分析相关蛋白分子水平的变化,探讨其可能的机制。结果：6株结肠癌细胞株中HCT116细胞的OTUD1蛋白表达水平最低,并成功构建过表达OTUD1基因的结肠癌细胞株HCT116-OTUD1。与对照组HCT116-Control细胞相比,HCT116-OTUD1细胞株迁移（P=0.000）和侵袭能力减弱（P=0.000）,CCK-8增殖实验显示实验组细胞增殖水平下降（P=0.004）,EDU流式检测结果显示细胞增殖水平下降（P=0.000）,克隆形成能力下降（P=0.017）。上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关分子E-cadherin表达水平上调,Vimentin表达水平下调,增殖相关信号通路分子p-AKT、p-ERK1/2表达水平下调。结论：过表达OTUD1可以通过减弱细胞的EMT作用来影响其迁移和侵袭能力,并抑制细胞的增殖能力,这种变化可能与MAPK/Erk和PI3K/Akt信号通路的激活受到抑制有关。
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