作者：靳鑫; 王石磊; 吴爽; 张祥; 魏杰; 阳媛; ...葡萄糖调节蛋白前s1蛋白蛋白质体外结合实验微量热泳动
摘要：目的：初步研究78kD的葡萄糖调节蛋白（the 78 kD glucose—regulated protein，GRP78）与乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）的前s1蛋白（Pre S1）的相互作用位点。方法：利用PCR技术扩增GRP78的基因，将扩增的目的基因克隆至pW28载体质粒，在大肠杆菌（Escherichia coli，E．coli）B834中表达，经过镍离子亲和层析柱纯化GRP78蛋白；将PreSl3个截短片段的重组质粒（pGSW—PreS1-x1／）（2／）（3）在B834中表达后，经过GST亲和层析柱纯化相应蛋白；利用蛋白质体外结合实验（pulldown）、微量热泳动（microscale thermophoresis，MST）检测GRP78与PreSl3个截短片段的相互作用。结果：成功构建重组质粒pW28-GRP78：获得GRP78蛋白及PreSl3个截短片段的融合蛋白：pulldown及MST实验验证了GRP78可以与PreS1的3个片段结合．且GRP78与GST—PreS1-X1结合效果最好。结论：利用分子克隆技术及蛋白质表达纯化技术，获得GRP78蛋白及PreS1截短片段的融合蛋白，并初步筛选了PreS1与GRP78的相互作用位点，为后续研究打基础。
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