布鲁氏菌BP26蛋白的原核表达及鉴定

作者：鲁友铭; 李俊萱; 吴胜昔; 曾政; 黄恒; 李...布鲁氏菌bp26重组蛋白原核表达镍柱纯化蛋白免疫印迹

摘要：为了实现布鲁氏菌BP26蛋白在原核宿主细胞进行高效表达,对布鲁氏菌BP26基因进行密码子优化,化学合成了BP26全基因,并将其克隆至pET30a(+)载体上,构建重组质粒pET30a(+)-bp26,转化至基因工程菌BL21(DE3),利用IPTG进行诱导表达。利用His-tag镍柱纯化BP26重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果显示:重组质粒经Nde I与Xhol I双酶切,酶切产物通过琼脂糖凝胶电泳显示与目的产物条带大小一致;当诱导条件为IPTG浓度1 mmol/L,37℃诱导8 h时,重组蛋白的表达量最高;纯化后的目的蛋白经过Western Blot鉴定,显示在27.8 kD左右有一条明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。本研究成功实现了在大肠杆菌高效表达BP26蛋白,为后续布病检测新试剂的研制及疫苗的研发奠定了生物学基础。

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