禽流感病毒HA蛋白的原核表达与鉴定

作者：李令臣; 侯力嘉; 吴胜昔; 李俊萱; 鲁友铭...禽流感病毒血凝素蛋白原核表达镍柱纯化蛋白免疫印迹

摘要：为了实现禽流感病毒血凝素(HA)蛋白在原核系统中高效表达,根据GenBank发表的HA(ID=DQ023145.1)基因序列,在不改变HA蛋白氨基酸序列的情况下,根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因序列,化学合成HA全基因。将其克隆到pET28a(+)载体中,构建重组质粒pET28a(+)-HA,转化至BL21工程菌进行诱导表达,利用His-tag镍柱纯化HA重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行SDS-PAGE分析及Western-blot鉴定。结果表明:当重组菌株pET28a(+)-HA/BL21(DE3)诱导条件为30℃、IPTG浓度为1mmol/L诱导8h时,HA蛋白表达量最高;SDS-PAGE电泳显示经镍柱纯化后HA蛋白纯度较高,Westernblot实验发现在预期的70kD处有明显的蛋白印迹条带,说明已成功实现了在大肠杆菌中高效表达禽流感病毒HA蛋白,为后续开展禽流感检测方法及疫苗的研究奠定了基础。

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