布鲁氏菌Omp16蛋白的原核表达与鉴定

作者：李俊萱; 吴胜昔; 曾政; 李令臣; 鲁友铭; ...布鲁氏菌omp16蛋白原核表达镍柱纯化蛋白免疫印迹

摘要：为实现布鲁氏菌Omp16蛋白在大肠杆菌中的高效表达,根据GenBank发表的Omp16(登录号为JF918760.1)基因序列,在不改变Omp16蛋白氨基酸序列的情况下,根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因序列,全基因合成Omp16基因,并将其克隆到pET28a(+)载体中,构建重组质粒pET28a(+)-Omp16,转化至BL21工程菌进行诱导表达,利用His-tag镍柱纯化Omp16重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明:当重组菌株pET28a(+)-Omp16/BL21(DE3)诱导条件为37℃、IPTG浓度为0.5mmol/L诱导6h时,Omp16蛋白表达量最高;SDS-PAGE电泳显示经镍柱纯化后Omp16蛋白达到了电泳纯,经Westernblot分析,目的蛋白具有抗原特异性,在21ku处出现阳性条带,与预期蛋白分子大小相符,因此成功在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达出布鲁氏菌Omp16重组蛋白,为后续单克隆抗体的制备和布鲁氏菌病的检测试剂的研发提供了参考。

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