降钙素原的原核表达及鉴定

作者：蒋棚俊; 吴胜昔; 王玲玲; 李令臣; 李俊萱...降钙素原原核表达镍柱纯化蛋白免疫印迹

摘要：为了实现降钙素原（PCT）蛋白在大肠杆菌中高效表达,对PCT的编码基因序列进行优化,通过化学方法合成优化后PCT基因,并将其克隆到p ET28a（＋）载体中,构建重组质粒p ET28a（＋）/PCT,转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受细胞中。将IPTG作为诱导剂诱导重组蛋白的表达,利用His-tag镍柱纯化PCT重组蛋白,并对纯化后的PCT重组蛋白进行SDS-PAGE电泳分析以及Western blot鉴定。结果表明：当重组菌株的诱导条件为0.5 mM IPTG 25℃诱导12h时,PCT蛋白表达量最高。SDS-PAGE电泳显示：纯化所得PCT蛋白纯度达到了90%以上。Western blot显示：在17KD处有明显的蛋白印迹条带,与预期相符。说明成功实现了在大肠杆菌中高效表达PCT蛋白,为后续开展PCT单抗的制备以及检测方法的研究奠定了基础。

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社