作者：郭凯庆 李振华 李耀平结肠肿瘤反向pcr脱氧核糖核酸酶i转录启动子
摘要：目的利用反向PCR法精确定位人结肠癌SW480细胞CD133基因启动子区对脱氧核糖核酸酶Ⅰ（DNaseⅠ）酶切敏感的位点。方法提取SW480细胞的细胞核,以10 U／ml DNaseⅠ处理细胞核10 min。反向PCR扩增：提取基因组,用限制性内切酶EcoRⅠ 和XmalⅠ片段化基因组,末端补平,T4连接酶连接,利用反向PCR后对产物测序,靠近限制性内切酶位点的序列即DNaseⅠ的切割位点。结果CD133基因转录起始点上游9个DNaseⅠ高敏感位被鉴别出,它们位于第一个外显子-700- -300 bp碱基区域内。结论用反向成环PCR技术可以精确测定DNaseⅠ的剪切位点,这些位点聚集在一个特定的区域内。
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