作者：李文林 饶泽昌 赵林 刘东海 唐洪林 石小...嘌呤核苷磷酸化酶自杀基因重组逆转录病毒载体大肠杆菌
摘要：[目的]构建稳定表达ePNP（E.coliPNP）的细胞模型，为肿瘤的基因治疗提供实验基础。[方法]提取大肠杆菌E.coliK12总DNA，PCR方法克隆大肠杆菌ePNP基因，构建逆转录病毒载体质粒pMSCV-ANGPTL4，鉴定测序。脂质体法将三种逆转录病毒载体pMSCV-ANGPTL4、pVSV、pGAG-POL共转染293-EBNA包装细胞，获得高滴度病毒并感染MDA-MB435细胞。荧光显微镜与RT-PCR检测MDA-MB435细胞ePNP基因的表达。[结果]所克隆的ePNP基因与文献报道一致；成功构建了pMSCV/ePNP重组逆转录病毒载体；ePNP基因在MDA-MB435细胞中获得稳定表达。[结论]pMSCV/ePNP自杀基因载体的成功构建及其表达为ePNP应用于肿瘤基因治疗奠定了基础。
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