作者：渠香云; 程燚睿; 高鹏; 朱远远; 董肇楠; ...乳腺肿瘤外泌体聚乙烯二醇类临床实验室技术微rnas
摘要：目的：构建一种采用聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）富集血清中外泌体并进行分离的方法。方法：分别采用PEG8000、商品化EXOQuick试剂盒以及超速离心法富集血清外泌体。采用透射电子显微镜和Nano Sight NS90法对分离得到的外泌体的粒径进行检测。蛋白质印迹法比较3种方法获得的血清外泌体表面标志物CD9表达的丰度;实时荧光定量PCR法检测乳腺癌、乳腺良性病变及健康志愿者血清和血清外泌体中微RNA-21（micro RNA-21,mi R-21）的表达趋势。结果：本研究构建获得的PEG分离外泌体的方法,在粒径分布和外泌体表面标志物CD9表达丰度方面,优于超速离心法,与商品化的EXOQuick试剂盒效果相当。PEG法富集获得的乳腺癌患者血清外泌体中mi R-21的表达水平较乳腺良性病变明显上调（P=0.024）,上调倍数为2.68倍;而直接从血清中检测mi R-21在乳腺疾病患者血清中表达水平的结果显示,乳腺癌患者和乳腺良性病变患者基本没有变化（P=0.373））。结论：本研究构建的外泌体富集试剂及其方法,操作简便、耗时短、成本低。与直接检测血清中mi RNA的表达水平相比,可明显增加检测效率。
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