作者：李亚; 陈思成; 王静; 邓芳; 孙燕婷; 李汪...癌非小细胞肺单核细胞源性巨噬细胞血管内皮生长因子受体3基质金属蛋白酶2
摘要：目的 ：探讨M2型巨噬细胞在肺腺癌A549细胞迁移和侵袭中的作用及其可能涉及的信号通路和作用机制。方法 ：采用佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA）诱导THP-1细胞,使其分化为M2型巨噬细胞。通过Transwell小室建立M2型巨噬细胞与A549细胞的体外非接触式共培养模型,并收集M2型巨噬细胞与A549细胞共培养后的培养液。分别采用划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测M2型巨噬细胞与A549细胞共培养液处理A549细胞（CO-A549细胞）后对其迁移和侵袭能力的影响。蛋白质印迹法检测CO-A549细胞中血管内皮生长因子受体（3vascular endothelial growth factor receptor 3,VEGFR3）及血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C）蛋白表达水平的改变。采用特异性针对VEGFR3的抑制剂MAZ51处理CO-A549细胞后,再用划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测抑制VEGFR3表达后CO-A549细胞迁移和侵袭能力的改变;蛋白质印迹法检测对其细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated protein kinase,ERK）活性[磷酸化ERK（phospho-ERK,p-ERK）]的影响。最后,采用RT-PCR法检测MAZ51和丝裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase,MAPK）/ERK信号通路抑制剂U0126作用于CO-A549细胞后对基质金属蛋白酶2 m RNA表达水平的影响。结果 ：佛波酯诱导THP-1细胞分化为M2型巨噬细胞;M2型巨噬细胞与A549共培养液能促进A549细胞的迁移和侵袭能力,并上调VEGFR3和VEGF-C的表达水平（P值均〈0.01）;抑制VEGFR3表达后,CO-A549细胞的迁移（P〈0.01）和侵袭能力（P〈0.05）均被降低,p-ERK的表达水平明显下调（（P〈0.05）;MAZ51和U0126作用于CO-A549细胞后基质金属蛋白酶2 m RNA水平均被明显降低（P值均〈0.01）。结论：经过分化诱导THP-1细胞获得的M2型巨噬细胞,可通过提高VEGFR3的表达水平而促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与活�
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