三种FLAG融合标签的构建、表达及亲和常数测定

作者：戴志昂 丁先锋flag融合标签免疫吸附纯化亲和常数

摘要：FLAG融合标签是由8个氨基酸组成的短肽，可用于重组蛋白的免疫吸附纯化。为了建立一个基于FIAG融合标签的共表达纯化体系，将2个新的FLAG标签序列DYKDYKDYK和DYKDEDDK与FLAG标签的原有序列DYKDDDDK分别命名为FLAG1、FLAG2和FLAG3，利用PCR将FLAG标签融合到SHP2酪氨酸磷酸酶NSH2结构域序列的C端，并将其重组到原核表达载体pGEX-2T中，并在大肠杆菌中进行表达。利用GST亲和层析柱和分子筛层析柱纯化融合蛋白，Western blotting法检测其免疫活性。免疫印迹结果表明，3个FLAG融合标签都可以被抗-FLAG单克隆抗体M2（AFM2）特异性识别。利用ELISA技术测定3个FLAG标签与AFM2的亲和常数（1/Kd），其Kd值分别为0．1438、0．1281、0．0801μmol／L。

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