微小RNA-29b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制

作者：姜贻乾; 郭庆敏; 谷建钟; 徐小平; 安素红...微rnas慢病毒属转染聚合酶链反应细胞增殖肿瘤转移肿瘤细胞培养的

摘要：目的：研究微小RNA（miRNA）-29b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制。方法：构建miRNA-29b重组慢病毒表达载体lenti-miRNA-2：9b转染293T细胞获得重组慢病毒，提纯慢病毒颗粒感染乳腺癌细胞MCF-7。通过绿色荧光蛋白肿瘤细胞比例来验证转染情况；实时定量PCR检测miRNA-29b的表达水平；CCK-8实验和Transwell实验检测miRNA-29b过表达后乳腺癌细胞生物学行为的变化。采用生物信息学软件对miRNA-29b调控的下游靶基因进行预测和筛选，使用双荧光素酶检测、实时定量PCR和蛋白质印迹法进行验证。对筛选出的miRNA-29b调控的下游靶基因RTKN通过siRNA-RTKN验证其对MCF-7细胞的增殖和迁移的影响。结果：成功构建了miRNA-29b的重组慢病毒表达载体。感染乳腺癌细胞McF-7后．1enti．miRNA．29b组和空载体转染组分别有90％和60％左右的细胞出现绿色荧光；lenti．miRNA-29b组miRNA-2，9b表达量较空载体转染组和空白对照组显著增加（均P〈0．05）。MCF-7细胞的增殖和迁移能力较空载体转染组显著减弱（均P〈0．05）。RTKN的基因编码3＇UTR区中具有miRNA-29b的结合位点；野生型RTKN-WT．3’UTR报告基因载体与lenti-miRNA-29b共转染MCF-7细胞后可使荧光素酶的活性显著下降（P〈0．05）。转染siRNA-RTKN后，MCF-7细胞中RTKN蛋白的水平显著下降。细胞增殖和迁移能力显著减弱（均P〈0．05）。结论：miRNA-29b能够通过抑制RTKN的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。

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