淫羊藿苷促进胶原水凝胶三维立体培养成骨细胞的成熟分化

作者：谢艳芳; 王鸣刚; 陈克明; 石文贵; 周建; ...细胞外基质淫羊藿甙水凝胶胶原细胞培养的

摘要：目的：研究淫羊藿苷对胶原水凝胶三维立体培养的新生大鼠颅骨成骨细胞（ ROB）分化和成熟的影响。方法：取新生SD 大鼠颅骨，酶消化法培养ROB，将传代1次的ROB包埋于2 mg／mL的Ⅰ型鼠尾胶原中进行三维立体培养，48 h后进行双乙酸荧光素／碘化丙啶（ FDA／PI ）细胞染色、苏木素－伊红（ HE ）染色，并用扫描电镜观察细胞生长状态。分别采用终浓度为1×10^-4、1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7 mol／L的淫羊藿苷进行干预，培养3、6、9 d后分别检测细胞内碱性磷酸酶活性，筛选最佳药物浓度；以最佳浓度淫羊藿苷干预三维凝胶中的ROB 12、24、36、48 h后，用实时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测骨形态发生蛋白2（ BMP－2）、Runt相关转录因子2（RUNX－2）、Osterix mRNA及其蛋白表达情况。结果：胶原水凝胶三维立体培养的ROB 采用FDA／PI染色、HE染色以及扫描电镜结构显示， ROB在胶原水凝胶中分布均匀，生长状态良好。终浓度为1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7 mol／L的淫羊藿苷可显著提高三维凝胶中ROB的碱性磷酸酶活性，其中以1×10^-6 mol／L浓度淫羊藿苷干预后ROB 的碱性磷酸酶活性最高。 1×10^-6 mol／L 淫羊藿苷能显著提高BMP－2、RUNX－2、Osterix mRNA及其蛋白表达量。结论：淫羊藿苷可显著促进三维立体培养的ROB成骨性相关因子的表达，提示淫羊藿苷对胶原水凝胶三维立体培养的ROB具有较强的促骨形成活性。

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