人CYP3A4与POR和cytb5的三重共表达及其条件优化

作者：谢章明; 刘文慧; 徐迎春; 陈枢青细胞色素b5类细胞色素p450酶系统氧化还原酶类药物相互作用药物设计昆虫细胞学基因病毒细胞培养的

摘要：目的：研究人CYP3A4与POR和cytb5用悬浮细胞共表达时的最佳条件。方法：悬浮培养Sf9细胞，分别摸索摇床的温度、转速、摇瓶中细胞液的量、表面活性剂的加量、细胞的培养时间，以及3种病毒的加量比例等条件，并进行优化；然后，将表达产物制成微粒体后用于睾酮的代谢，并分别测其代谢活性。结果：当恒温摇床的温度为27℃，转速为90r／min，每250ml摇瓶中加入80～120ml细胞密度为5×10^5个／ml的细胞液，并加入0．1％的Pluronic F．68，细胞培养72h时，最适合细胞的生长和目的蛋白的表达。此时，当3种病毒的加量比例为1：l：1时，表达条件最佳，其对底物睾酮代谢的Km值、Vmax和CLint分别为119．6μmol／L、0．52μmol／（min·g蛋白）和4．34ml／（min·g蛋白）。结论：通过三重共表达CYP3A4、POR、cytb5，以及对表达条件的优化，提高了目的蛋白的表达量，得到了较高代谢活性的CYP3A4，从而为新药代谢及药物一药物相互作用研究奠定了基础，为药物代谢酶的大量表达提供了可行的方案。

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