利用细菌／杆状病毒系统在昆虫细胞中表达人CYP2E1

作者：路珂 曾苏 姚形炜杆状病毒科细胞色素p450酶系统重组遗传细胞色素p450杆状病毒草地夜蛾细胞氯唑沙宗

摘要：目的：获得人CYP2E1重组酶，并用该重组酶的特征性探针底物对其进行代谢活性研究。方法：以人肝组织RNA为模板，通过RT—PCR得到CYP2E1cDN断，然后与pFastBac质粒连接，得到pFastBac—CYP2Ej重组质粒，将其转化E．coli DH 10Bac大肠杆菌，通过转座作用，获得重组Bacmid—cyP2Ej，将其转染草地夜蛾细胞（Sf9）后，产生重组杆状病毒。将该病毒以及分别含有人CYPOR和人CYPb5的病毒共同感染Sf9细胞，收集共表达蛋白，以氯唑沙宗为底物鉴定重组酶的活性。结果：利用细菌／杆状病毒系统得到重组人CYP2E1的表达，其对氯唑沙宗的K。值为（72．4±8．7）pmol·L^-1,Vmax值为（2．41±0．10）μmol·min^-1·g^-1蛋白。结论：利用杆状病毒系统成功表达了有催化活性的人CYP2E1重组酶，其活性与文献报道值相似。

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