作者：李欣; 姜潇; 陈滢洁; 孙银萍; 宋玉华乳腺癌slug成管
摘要：目的在肿瘤发生和发展过程中,上皮细胞-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是上皮来源恶性肿瘤细胞获得侵袭、转移能力的重要生物学过程,并且与乳腺癌干细胞的生物学特性密切相关。本研究通过构建Slug的慢病毒真核表达载体,探讨Slug基因与EMT之间的关系及对乳腺癌干细胞生物学特性的影响。方法以军事医学科学院（生物工程研究所）保存的乳腺cDNA文库为模板,通过PCR扩增出Slug的全长编码序列,将其克隆到经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切的PCDH表达载体上,构建成PCDH-Slug真核表达载体,在人293T细胞中转入空载体和重组质粒,利用蛋白质印迹法检测PCDH载体介导的Slug的表达。后将包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,感染ZR75-1细胞,经Puro（嘌呤霉素）筛选2周后,得到稳定表达Slug的ZR75-1细胞株,检测ZR75-1细胞对EMT的影响。并将稳定表达Slug的ZR75-1稳定细胞接种于的Matrigel基质胶,倒置显微镜观察ZR75-1稳定细胞株的成管特性。结果从乳腺文库中获得Slug的全长编码序列,经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切及DNA测序证实得到PCDH-Slug表达载体,PCDH-Slug真核表达载体和PCDH分别转染293T细胞后,经过蛋白质印迹法检测Slug在293T细胞内有显影,对照组明显减弱,表明Slug-PCDH载体携带的Slug编码序列能够在293T细胞中成功;通过增加puro的含量进行筛选,得到稳定表达的混合克隆即能表达Slug的ZR75-1细胞株,经蛋白质印迹法检测PCDH-Slug对E-cadherin的影响,以GAPDH为内参,结果比对照组的表达减弱,与预期相符,表明PCDH-Slug载体可以使细胞中E-cadherin的表达减弱;倒置显微镜下ZR75-1稳定细胞株成管明显,表明Slug可以通过调节EMT使乳腺癌细胞具有某些干性特征。结论调节Slug基因表达可以影响EMT相关蛋白的表达,并以此影响乳腺癌干细胞的生物学特性。
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