作者：陈建勇 罗斌 郭晓白 万里晖自杀基因基因stat3结肠癌细胞hct116huvec
摘要：目的构建含CDglyTK基因和靶向干扰信号转导和转录激活因子3（STAT3）基因的真核表达载体，探讨多基因联合治疗对结肠癌细胞的抑制作用。方法采用聚合酶链反应（PCR）方法，扩增大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因和带状疱疹病毒胸苷激酶（TK）基因，经测序、酶切、连接、转化、提取筛选的重组质粒。采用酶切和PCR电泳法鉴定所构建质粒。构建靶向STAT3基因shRNA真核表达质粒。将重组质粒转染HCT116和HUVEC细胞，采用RT—PCR检测CDglyTK基因表达和干扰STAT3基因的效果。采用Westernblot法检测干扰STAT3蛋白表达的水平。四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）法检测前药对转染了重组质粒pEGFP／CDglyTK、pEGFP／STAT3siRNA的HCT116和HUVEC细胞的抑制率。结果重组质粒pEGFP／CDglyTK经限制性酶切、PCR电泳法鉴定分析显示质粒构建正确。RT-PCR法从转染了重组质粒pEGFP／CDglyTK的HCT116和HUVEC细胞中扩增出CDglyTK片段。RT—PCR和Westernblot结果显示，转染了pEGFP／STAT3siRNA的HCTll6细胞株的STAT3基因表达水平降低。MrI-I’法检测显示，前药对HCT116细胞的pEGFP／CDglyTK组的抑制率为（63．72±0．64）％，高于对照组（P〈0．05）；pEGFP／STAT3siRNA组抑制率为（47．02±0．39）％，低于pEGFWCDglyTK组（P〈0．05），但比对照组抑制率高（P〈0．05）；pEGFP／CDglyTK＋pEGFP／STAT3 siRNA组抑制率为（85．10±0．17）％，高于pEGFP／CDglyTK组和pEGFP／STAT3siRNA组（P〈0．05）。前药对HUVEC细胞的pEGFP／CDglyTK组的抑制率为（70．24±0．33）％，高于对照组（P〈0．05）；pEGFP／STAT3siRNA组抑制率为（46．32±0．15）％，低于pEGFP／CDglyTK组（P〈0．05），但高于对照组（P〈0．05）；pEGFP／CDglyTK＋pEGFP／STAT3siRNA组抑制率为（87．10±0．24）％，高于pEGFP／CDglyTK组和pEGFP／STAT3siRNA组（P〈0．05）。结论重组质粒pEGFP-CDglyTK和pEGFP／STAT3siRNA对HCT116和HUVEC�
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