作者：刘英; 朱平; 胡亚美急性b淋巴细胞白血病表位细胞毒t淋巴细胞基因正常供者pcr产物序列重链可变区
摘要：目的分析儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞免疫球蛋白重链可变区(IgHV)的基因特征,确定IgHV的细胞毒T淋巴细胞(CTL)识别表位.方法 PCR扩增37例儿童B-ALL的7个IgHV基因家族,PCR产物直接测序,利用生物信息资源,分析所得序列的特征并预测B-ALL细胞IgHV上与HLA-A*0201分子结合的九肽.合成预测九肽QLVQSGAEV,进行T-B杂交瘤细胞系(T2)结合实验,用荷肽抗原呈递细胞,反复刺激HLA-A*0201正常供者外周血中肽特异性CD8+T细胞的扩增.结果37例B-ALL均检测到IgHV基因,经PCR产物测序,得到40份IgHV基因序列,它们优先利用基因片段VH4-34(12.5%)和VH4-59(10.0%).B-ALL细胞的IgHV基因利用D7-27片段的频率(15.4%)和在DJH结合区缺乏非编码核苷酸的频率(20.0%),均明显高于正常成人外周血淋巴细胞的IgHV基因.17.5%的序列含有不到2%的替代突变.从40份B-ALL细胞的IgHV序列,预测出12条与HLAA*0201分子有高亲和力的九肽,10条(83.0%)位于框架1和3区.合成九肽QLVQSGAEV使T2细胞表面HLA-A*0201分子的表达强度提高1.6倍.HLA-A*0201正常供者外周血中的QLVQSGAEV特异性CD8+T细胞,在荷肽抗原呈递细胞的重复刺激下,由2轮刺激后的1.6%增至3轮刺激后的82.6%.结论儿童B-ALL的IgHV基因为胚系基因,重链框架区有与HLA-A*0201结合的抗原九肽,这些九肽能够诱导特异性CD8+T细胞的活化和增殖.
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