作者：高艳娥; 张菊; 陈中灿; 宋天保; 赵艳; 张...hpve7基因宫颈癌组织克隆和表达阳性标本扩增重组体克隆表达高效表达诱导表达
摘要：目的检测颈癌组织中人乳头瘤病毒58型(HPV58)并克隆表达其E7基因.方法采用 GP5+/GP6+引物系统扩增58例宫颈癌组织,将荧光偏振(FP)检测技术与模板指导的末端延伸反应(TDI-FP)结合,检测HPV58,确定HPV58感染阳性宫颈癌组织.用特异引物从HPV58阳性标本中扩增HPV58 早期表达蛋白E7基因,将其连入pGEM-T Easy载体,获得克隆重组体HPV58E7-pGEM-T,并测序验证.将E7基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E7表达重组体pRSET-58E7,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG诱导表达.结果 58例宫颈癌标本中,HPV58阳性10例,占52例HPV阳性标本的19.2%.从其中扩增到了HPV58 E7基因并构建了其克隆和表达重组体.其表达重组体经IPTG诱导后,可表达Mr16×103的HPV58 E7 His6融合蛋白,表达量占菌体蛋白的30%.结论欧美国家少见的高危HPV58在中国陕西人宫颈癌组织中并不少见.HPV58 E7重组表达体可在大肠杆菌中高效表达,为HPV58相关肿瘤诊断试剂及疫苗的研制奠定了初步基础.
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