作者：付劲蓉; 刘文励; 周剑锋; 周玉峰; 徐酉华...多药耐药相关基因化疗前后电子克隆多药耐药细胞系白血病细胞多药耐药聚合酶链反应检测表达序列标记白血病细胞耐药抑制消减杂交基因芯片技术cdna序列生物信息学
摘要：目的探讨白血病细胞多药耐药发生的分子机理,寻找新的多药耐药相关基因.方法以HL-60细胞为'驱动方',以多药耐药细胞系HL-60/VCR为'实验方',建立人白血病多药耐药细胞系HL-60/VCR抑制消减杂交文库,利用基因芯片技术从中筛选出一条在野生型HL-60细胞中基本不表达,而在HL-60/VCR耐药细胞中呈低丰度差异表达的新表达序列标记序列.用表达序列标记拼接的同源基因克隆法得到人类新基因 HV126序列,再利用生物信息学数据库和软件对其进行功能的预测和分析.最后针对推导序列开放阅读框设计引物,逆转录-聚合酶链反应检测推导 HV126基因序列在临床白血病患者化疗前后白血病细胞中的表达.结果 HV126的cDNA 序列长1991 bp,编码365个氨基酸,其编码蛋白序列局部与新近发现的在细胞凋亡与炎症反应中起重要作用的蛋白基序'PYRIN'存在约43%的相似性.逆转录-聚合酶链反应结果提示该基因与白血病细胞受化疗药物的作用和耐药存在联系.结论 HV126可能是与白血病细胞耐药相关的一条新基因,有必要对该基因进行进一步的实验室克隆与功能研究.
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