作者：黎红华; 张苏明; 方思羽; 陈春莲; 汪道文...重组腺相关病毒载体转染介导lacz基因表达骨骼肌股动脉注射报告基因目的基因质粒
摘要：目的研究重组腺相关病毒载体(recombinant adeno-associated virus vector, rAAV)介导的β-半乳糖苷酶的结构基因LacZ,构建的rAAVLacZ病毒经不同途径给药后骨骼肌的转染效率、表达持续时间,为rAAV载体介导的目的基因对Duchenne肌营养不良的基因治疗探索合适的给药途径.方法采用报告基因LacZ、包装质粒PXX2、腺病毒成份辅助质粒PXX6三质粒共转染293细胞,包装重组腺相关病毒载体介导的rAAVLacZ,将rAAVLacZ局部腓肠肌肌肉注射转染至C57/BL6鼠骨胳肌,分别于单点注射后2个月、5个月取肌肉切片X-Gal染色.采用经股动脉注射rAAVLacZ观察LacZ基因在后肢骨骼肌的转染表达.结果 (1)C57/BL6鼠局部肌注rAAVLacZ后, 2个月和5个月时,均呈LacZ基因阳性表达,5个月时无表达减低.(2)经股动脉注射rAAVLacZ, C57/BL6小鼠后肢骨骼肌的肌膜及血管壁平滑肌LacZ基因广泛转染.结论重组腺相关病毒载体介导的报告基因LacZ可在C57/BL6鼠骨胳肌中高效持续表达5个月以上,经股动脉转染是有希望的下肢肌肉转染途径,此工作为神经肌肉遗传病,尤其是Duchenne肌营养不良基因治疗的进一步研究奠定了基础.
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