作者:张世能 峗淑莉 黄凤婷 钟娃 庄晓虹 梁爱...胰腺肿瘤干细胞培养基无血清悬浮法
摘要:目的建立无血清悬浮培养分离人胰腺癌细胞系PANC1干细胞球的方法。方法采用无血清悬浮法培养PANC1细胞,显微镜下观察干细胞球形成率;流式细胞仪检测细胞CD133表达和细胞周期;以含10%FBS培养基诱导干细胞球细胞分化,荧光显微镜下观察细胞形态及CK18的表达;干细胞球细胞接种NOD/SCID小鼠皮下,观察其成瘤能力。结果在无血清悬浮培养条件下存活的PANC1细胞形成干细胞球,体外连续传代培养20代始终保持4‰~5‰的干细胞球形成率。干细胞球细胞CD133表达率(5.91±0.7)%,G0/G1期细胞占(80.99±2.60)%,与原代PANC1细胞的(1.44±0.52)%和(69.01±5.03)%相差显著(P〈0.05)。将干细胞球细胞置含血清培养基中培养,细胞逐渐恢复原代细胞形态,并表达上皮标志蛋白CK18,2×10^3的干细胞即在NOD/SCID小鼠皮下成瘤。结论无血清悬浮法培养PANC1细胞可分离出肿瘤干细胞,其具有自我更新、多向分化和成瘤能力。
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