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小鼠视网膜神经节细胞的纯化培养

作者:黄萍 张纯 王薇 张绍敏 ColinJ.Barnstabl...视网膜神经节细胞细胞培养的小鼠

摘要:目的建立小鼠视网膜神经节细胞的体外纯化培养方法。方法实验研究。采用Thy-1.2单克隆抗体免疫吸附法,将8~12只生后4~6d的C57BL/6小鼠视网膜消化后,制成视网膜神经细胞混合悬液,应用胶质细胞特异性抗体CDllb室温孵育后,去除混悬液中的胶质细胞,应用特异性抗体Thy.1.2吸附混合悬液中的视网膜神经节细胞,接种于预先应用多聚赖氨酸包被过的24孔培养板中,置于1cm×1cm的载玻片上。在温度37℃、体积分数5%的CO2培养箱中培养。观察视网膜神经节细胞的数目和轴突生长情况。结果细胞接种后24h即完全贴壁,视网膜神经节细胞的纯化率达90%以上,细胞生长良好,部分细胞伸出突起,随时问延长轴索逐渐延长,有些轴索的长度可达胞体的5倍以上,呈竹节状,近末端逐渐膨大。2周后可见到死亡细胞,3周时仍有少量存活细胞,但死亡的细胞占多数。结论采用Thy-1.2单克隆抗体免疫吸附法可成功纯化培养小鼠的视网膜神经节细胞。(中华腹科杂志,2011,47:129-133)

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