作者：肖青; 石浩军; 吕明良; 曾水清; 邝文辉rna小分子干扰核蛋白质类dna结合蛋白质类血管内皮生长因子a缺氧色素上皮眼
摘要：目的探讨缺氧条件下人视网膜色素上皮（hRPE）细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法利用体外转录法合成针对HIF—1α mRNA序列的靶点之一的小发卡环RNA（shRNA），以化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞缺氧环境，对缺氧培养条件下hRPE细胞的HIF-1α进行RNA干扰，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HIF-1α和VEGF mRNA的表达，免疫印迹法检测HIF—1α和VEGF蛋白水平，以正常组、缺氧组及阴性转染组作为对照，观察其对HIF-1α基因的沉默效果及对VEGF表达的抑制作用。结果转染HIF-1α mRNA的特异性shRNA后，RT-PCR检测结果显示缺氧条件下hRPE细胞HIF-1α基因沉默效果为77．1％，VEGF mRNA的表达水平下降了27．8％；免疫印迹法检测结果显示HIF—1α和VEGF蛋白水平显著降低。结论针对HIF-1α mRNA的shRNA能有效地使HIF-1α基因沉默，进而抑制缺氧对VEGF的上调作用。（中华眼科杂志．2007。43：1022—1027）
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