作者：盂丽珠; 陈松; 刘艳; 王玉川; 林锦镛; 韩...视网膜新生血管化缺氧诱导因子1a亚基血管内皮生长因子类rna干扰糖尿病实验性
摘要：目的观察缺氧诱导因子一1α（HIF一1α）特异性小干扰RNA（siRNA）对糖尿病大鼠视网膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达的抑制作用。方法随机对照研究。以pSilencer2．1-U6neo为质粒载体，构建HIF-1asiRNA重组质粒。雄性Sprague—Dawley大鼠54只，随机分为正常对照组和实验组，分别为15、39只大鼠。实验组大鼠尾静脉注射链尿佐菌素（STZ）诱导建立糖尿病动物模型，再分为糖尿病模型组、空载体组和基因治疗组，分别为15、12、12只大鼠。脂质体Lipofectamine^TM 2000介导，空载体组和基因治疗组分别转染pSilencer空载体质粒和HIF-h-lasiRNA重组质粒，糖尿病模型组和正常组对照组不做转染。采用实时逆转录（RT）-聚合酶链式反应（PCR）检测各组大鼠VEGFmRNA的表达。分别于干扰后24、48、72h，1周时计算VEGFmRNA的抑制效率。采用单因素方差分析和LSD-t检验进行统计学分析。结果HIF-1α siRNA重组质粒经酶切、测序鉴定，确定为目的序列。实时RT-PCR检测结果显示，正常对照组仅见弱的VEGFmRNA表达，糖尿病模型组及空载体组表达明显上调，基因治疗组表达下调；各时间点空载体组与糖尿病模型组比较，差异无统计学意义（t=0．669，0．142，0．151，0．025；P=0．514，0．889，0．882，0．980），基因治疗组较糖尿病模型组及空载体组表达下调，差异有统计学意义（t=8．768、13．695、11．285、8．253，t=9．437、13．554、11．436、8．228；P值均=0．000）；VEGFmRNA抑制率24、48、72h和1周时分别为32．76％、43．60％、47．70％、50．86％。结论HIF-1α siRNA重组质粒能有效抑制糖尿病大鼠视网膜中VEGFmRNA的表达。
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