作者:毛俊峰; 刘双珍; 秦文娟; 李凤云; 谭浅; ...巨噬细胞细胞培养技术流式细胞术muller细胞
摘要:目的观察以腹腔渗出细胞为饲养细胞对原代培养的成年大鼠视网膜Muller细胞生长状态的影响。方法制备大鼠腹腔渗出细胞,CD68免疫组织化学染色鉴定巨噬细胞,墨汁吞噬实验检测吞噬活性。酶消化法原代培养成年大鼠视网膜Muller细胞,神经胶质酸性蛋白(GFAP)和波形蛋白免疫组织化学染色鉴定。饲养细胞加入Muller细胞进行共培养后,流式细胞术分析Muller细胞的生长周期,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口翻译法(TUNEL)染色检测凋亡情况。结果大鼠腹腔渗出细胞中巨噬细胞占95%以上,对墨汁颗粒有良好的吞噬能力。原代培养的Muller细胞贴壁生长,胞体较大、扁平,第3代细胞生长减慢。加入饲养细胞后,Muller细胞生长增生加快,S期和G2/M期细胞增多(S期,t=4.172,P〈0.001;G2/M期,t=3.562,P〈0.01),第1代细胞生长时间由25-30d缩短至18-22d,第2代由10-15d缩短至7-10d;Muller细胞凋亡减少(t=3.804,P〈0.01)。结论以腹腔渗出细胞为饲养细胞能促进Muller细胞的生长增生,抑制其凋亡,加快Muller细胞的培养速度,是原代培养成年大鼠视网膜Muller细胞的一种有效方法。
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