作者：夏欣; 许迅; 顾青牛视网膜微血管内皮细胞brec周细胞brp体外培养细胞形态学
摘要：目的探讨牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)和周细胞(BRP)的体外选择性培养方法.方法结合视网膜微血管的消化分离,采用含10%人血清、100μg/m1肝素的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)和含20%胎牛血清的DMEM培养基分别选择性培养BREC和BRP.通过荧光显微镜观察乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)吞噬情况,应用Von Willebrand因子抗体通过免疫组织化学方法鉴定BREC,并通过α-平滑肌肌动蛋白抗体免疫组织化学鉴定BRP.结果通过选择性培养获得的BREC和BRP的纯度达到98%以上,并能连续传代.BREC早期似小鲤鱼状聚集在微血管碎片周围,呈片状鹅卵石样单层生长,存在接触性抑制;BRP多散布在距血管碎片稍远处,形状不规则,呈无接触性抑制生长.BREC可吞噬Dil-Ac-LDL,细胞浆内有荧光表达;消化传代后,BREC中Von Willebrand因子表达阳性,而α-平滑肌肌动蛋白表达阴性;BRP的α-平滑肌肌动蛋白表达阳性,而Von Willebrand因子表达阴性.结论选择性培养基的应用和培养皿的处理可分别获得较高纯度的BREC和BRP,简单且具有良好的重复性,无需额外步骤来去除BREC中混杂的BRP.
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