作者:李庆华; 芦颖; 金薇娜; 蔺亚妮; 胡蓉华; ...cafipofide细胞酸化p糖蛋白抗药性多药
摘要:目的探讨细胞酸化对患者原代白血病细胞P糖蛋白(P—glycoprotein,P—gp)和mdrl表达的影响,为逆转白血病多药耐药(MDR)提供新方法。方法采用实时定量RT—PCR技术检测mdrl mRNA表达水平的变化,筛选出P—gp高表达的患者白血病细胞。应用钠氢离子交换蛋白1特异性抑制剂Cariporide和高钾缓冲液对细胞进行酸化,采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响。应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值(Intracellular pH,pHi)及细胞酸化对细胞内阿霉素累积的影响,应用流式细胞术检测细胞酸化对细胞中P—gp功能的影响,采用Western blot检测细胞酸化对细胞P—gp表达水平的影响。结果患者细胞pHi降低到7.0,酸化1h后mdrl mRNA表达量分别降至对照组的0.532±0.110,酸化3h后降至对照组的0.166±0.070;酸化3h后P—gp的蛋白水平降至对照组的0.560±0.090;细胞pHi 7.01h后细胞内罗丹明123(Rhodaminel 123,Rh123)累积由对照组的20.07±0.39明显增加至71.03±0.47,激光共聚焦显微镜观察结果也证实酸化增加细胞内阿霉素累积。结论细胞内酸化能够抑制患者细胞P—gp表达和功能。
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