作者:杨涛; 王宏伟; 徐菁; 张丽; 朱镭基因wt1rna干扰细胞系抗药性多药
摘要:目的探讨WT1基因表达下调对人红白血病耐药细胞系K562/A02阿霉素敏感性的影响。方法将WT1mRNA的短发夹RNA(shorthairRNA,shRNA)构建至真核表达载体后转染K562/A02细胞,流式细胞术检测转染效率;荧光定量RT—PCR和Westernblot法分析WT1基因在转染前后表达的差异;pWT1shRNA转染K562/A02细胞48h并经阿霉素作用后,MTT法检测各组细胞阿霉素IC50值;流式细胞术检测细胞阿霉素累积量及细胞凋亡率。结果与未转染对照组及空载体组相比,转染WT1shRNA质粒的K562/A02细胞WTImRNA和蛋白水平均明显降低;经阿霉素诱导24h后,其对阿霉素的敏感性明显增高,相对逆转率为71.5%,细胞内阿霉素的累积量较各对照组明显增高(P值均〈0.05),细胞凋亡率明显升高(P〈0.05)。结论靶向WT1shRNA干扰质粒可有效抑制K562/A02细胞WT1基因表达,增强K562/A02细胞对阿霉素的敏感性。
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