作者：王宏斌; 冯文莉; 黄世峰; 田文君; 曹唯希...基因p53中心体k562细胞腺病毒载体
摘要：目的研究重组腺病毒介导的野生型p53基因（Ad5wtp53）对人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞系中心体数量和中心体蛋白表达的影响。探讨应用重组腺病毒p53基因对CML进行基因治疗的可行性。方法分别将含有野生型p53基因、突变型p53基因和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体（Ad5wtp53、Ad5mtp53和AdSGFP）反复扩增，联合多聚季胺共同感染K562细胞，观察感染效率。MTT法确定最适重组腺病毒感染滴度和感染时间。然后用RT-PCR和Western blot检测p53 mRNA和蛋白的表达。最后应用间接免疫荧光染色法对中心体γ-微管蛋白和纺锤体α-微管蛋白同时进行标记，在激光共聚焦显微镜下观察中心体γ-微管蛋白的表达和有丝分裂，并对中心体进行计数。结果多聚季胺可显著提高腺病毒载体对K562细胞的感染效率。多聚季胺的剂量选择为4μg／ml；感染K562细胞的最适腺病毒滴度为20 000 MOI，感染时间为72h；Ad5wtp53和AdSmtp53转染的K562细胞均可表达p53 mRNA和蛋白。Ad5wtp53感染K562细胞后，中心体数量减少，γ-微管蛋白的表达降低。结论重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达；野生型P53蛋白能够降低K562细胞中心体数量及中心体γ-微管蛋白的表达。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
