作者：闫荣; 戴克胜血小板蛋白激酶a钙依赖蛋白酶
摘要：目的探讨蛋白激酶A（proteinkinaseA，PKA）对血小板膜糖蛋白（Glycoprotein，GP）Ⅰbα表达的调控作用。方法用健康人洗涤血小板与PKA抑制剂H89温育。用Westernblot检测血小板悬液中GPⅠbα的酶切片段糖萼蛋白（glycocalicin，GC），并用流式细胞术检测GPⅠbα的膜表达量。用Western blot检测血小板骨架蛋白的酶切程度来确定钙依赖蛋白酶（calpain）活性，并用流式细胞术检测血小板表面calpain的表达。用血小板聚集仪检测PKA抑制剂H89对瑞斯托霉素诱导的血小板聚集功能的影响。结果洗涤血小板经H89处理后，血小板表面GPIbd被酶切并释放于血小板悬液中，使血小板表面GPⅠbα的表达水平显著降低（P〈0．05）。多种calpain抑制剂与血小板预温育均可减少GPⅠbα的酶切程度，表明PKA抑制剂所致的酶切是calpain依赖性的。肌动蛋白结合蛋白（actin—binding protein，ABP）和踝蛋白（talin）的酶切表明calpain可被PKA抑制剂激活，流式细胞术结果表明calpain在血小板表面有所表达。血小板经PKA抑制剂处理后，瑞斯托霉素诱导的聚集功能受到抑制。结论抑制血小板PKA活性，可导致calpain依赖性的GPⅠbα酶切，使GPⅠbα膜表达量减低，并导致GPIbd依赖的血小板聚集功能减低。
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