作者：曹丽娟; 王兆钺; 苏燕华; 杨海燕; 赵小娟...出血聚合酶链反应限制性内切酶基因突变
摘要：目的分别对5例遗传性凝血因子Ⅴ（FⅤ）缺陷患者进行基因分析和家系调查，鉴定导致FⅤ缺陷症的基因突变。方法采用一期法检测血浆FⅤ活性，ELISA法检测血浆FⅤ的抗原含量，PCR法扩增FⅤ基因的25个外显子及其侧翼序列，DNA测序并与基因文库比对以确定基因异常，限制性内切酶酶切分析或直接测序患者直系家属及正常人相应的等位基因排除多态性影响。结果5例患者血浆FⅤ活性和抗原含量均明显降低，基因分析共发现6个致病突变，分别为G69969T（G2079V）、C45533T（R712Ter）、C46796T（R1133Ter）、G45366A（C656Y）、C46253T（R952C）及G16088C（068H），后3个是新的突变位点，其中C46253T（R952C）是国际上首次发现的位于B区的错义突变。通过对直系亲属和正常人相应的等位基因进行扩增测序或酶切分析证实了3个新的突变不是基因多态性所致。结论鉴定了5例Ⅰ型遗传性FV缺陷症的基因突变，其中包括2种无义突变和4种错义突变；错义突变导致FⅤ蛋白稳定性降低，引起血浆中FⅤ的含量减少。
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