作者：张磊; 于洁; 莫姝; 杨光; 李欣; 宪莹; 金...骨髓间充质干细胞造血干细胞纤维连接蛋白血小板生成素基因修饰
摘要：目的 观察纤维连接蛋白（Fn）、血小板生成素（TPO）融合基因修饰对人骨髓间充质干细胞（MSC）的影响。方法 构建携带Fn—TPO融合基因的重组逆转录病毒载体，并以其对骨髓MSC进行基因修饰；观察Fn—TPO基因在骨髓MSC中的表达，以及基因修饰后骨髓MSC的体外增殖、黏附造血细胞和分泌TPO的能力；并将脐血CD34^＋细胞接种到基因修饰后骨髓MSC形成的滋养层，培养7d观察修饰后骨髓MSC对造血细胞体外扩增和集落形成能力的影响。结果成功构建携带Fn—TPO基因的重组逆转录病毒载体且以该逆转录病毒载体对骨髓MSC进行体外基因修饰；Fn、TPO基因在骨髓MSC内能够正常转录；基因修饰后的骨髓MSC体外增殖能力[（6．92±0．77）×10^4／ml]与对照组[（7．18±0．89）×10^4／ml]比较差异无统计学意义（P〉0．05）；基因修饰组和对照组黏附造血细胞能力分别为0．188±0．018和0．167±0．017（P〈0．01），分泌TPO能力分别为（7．46±0．59）ng／ml和（5．58±0．37）ng／ml（P〈0．01），细胞分泌TPO的能力不受培养时间的影响，但受细胞生长状态影响；2×10^4脐血CD34^＋造血干／祖细胞经基因修饰后骨髓MSC联合必要细胞因子体外扩增7d，有核细胞数、CD34^＋细胞比例、BFU—E、CFU—GM及CFU—GEMM分别为（29．9±2．7）×10^4、（33．3±2．8）％、109．3±4．1／1×10^4CD34^＋细胞、163．7±7．1／1×10^4CD34^＋细胞、13．3±1．5／1×10^4CD34^＋细胞，较对照组明显增加（P〈0．01）。结论 Fn-TPO基因修饰能够增强骨髓MSC黏附造血细胞、分泌TPO及支持脐血CD34^＋细胞扩增的能力。
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