作者:干惠珠; 张桂珍; 卢振霞; 卜丽莎; 杨绍娟...rna干扰基因mdr1耐药性多药细胞系
摘要:目的 探讨mdr1短发夹RNA(mdr1 shRNA)对人红白血病耐阿霉素细胞系K562/ADM的耐药逆转作用。方法 编码设计合成靶位mdr1基因mRNA具有19个碱基发夹结构互补的寡核苷酸模板,构建2个shRNA表达载体pSilencer^Tm3.1-H1 neo mdr1—A和mdr1—B,将其稳定转染K562/ADM细胞。用RT—PCR法检测转染后K562/ADM细胞mdr1 mRNA表达,Western blot检测P-糖蛋白(P—gP)表达,流式细胞术和MTT法分别检测K562/ADM细胞凋亡和对阿霉素的敏感性,用激光共聚焦荧光显微镜观察并测定细胞内柔红霉素的积累。结果 在pSilencer^TM3.1-H1 neomdr1—A和mdr1—B shRNA表达载体稳定转染的K562/ADM细胞,mdr1mRNA表达分别减少到转染前的35.9%(P〈0.05)和27.5%(P〈0.01);同时Western blot结果显示P—gP表达被明显而特异地抑制,对阿霉素的耐药性由79倍分别减低到38倍和30倍;并且,细胞内荧光强度与对照组相比显著增加(P〈0.05),与阿霉素联合应用凋亡细胞百分率分别增加至18.1%(P〈0.05)和54.4%(P〈0.01)。结论 靶向mdr1基因shRNA表达载体可有效逆转耐药,使耐药的肿瘤细胞恢复对化疗药物的敏感性。
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