作者：李栋博; 王季石; 方琴; 孙海燕基因克隆基因mgmt细胞转染抗药性
摘要：目的克隆六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）基因并构建表达载体，导入真核细胞表达，研究MGMT对真核细胞保护作用。方法利用RT—PCR克隆人肝细胞MGMT基因并重组构建真核表达载体。脂质体法导入K562细胞及人外周血单个核细胞（PBMNC），用实时定量PCR法检测目的基因的表达。MTT法检测转基因细胞对烷化剂耐药性的改变。结果成功克隆人MGMT基因，转染K562细胞和PBMNC后，转基因组MGMTmRNA表达水平分别是转染空载体组的13．4倍（P〈0．01）和4倍（P〈0．01）。Western blot结果显示MGMT蛋白表达在转基因组中明显高于转空载体组及对照组。耐药性实验结果显示目的基因导入后，K562稳定转染细胞和PBMNC瞬时转染细胞对烷化剂的半数抑制浓度分别提高到原来的7倍和2倍。结论MGMT基因导入可使真核细胞对烷化剂的耐药性得到不同程度的增强，从而对细胞起到保护作用。
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