作者：王向玲; 纪春岩; 马道新; 赵建强; 侯明; ...基因mdrl自杀基因基因治疗k562细胞
摘要：目的构建多药耐药基因（mdrl）启动子控制的胸苷激酶一胞嘧啶脱氨酶（CD—TK）双自杀基因真核表达载体，研究其对耐药白血病细胞K562／A02的靶向杀伤作用。方法利用分子克隆技术构建pcDNA3-mdr1P．CD—TK真核表达载体，脂质体介导法转染K562、K562／A02细胞，通过G418筛选获得稳定转染的细胞株。用PCR、RT—PCR鉴定TK、CD基因的稳定转染与表达，加用不同浓度的丙氧鸟苷（GCV）、5-氟胞嘧啶（5-FC）培养4d，用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法测定细胞存活率，用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建了mdrl启动子控制的CD-TK双自杀基因真核表达载体，脂质体成功转染细胞后，经G418筛选获得稳定转染细胞株。PCR结果显示，CD、TK基因均稳定存在于K562、K562／A02细胞中，RT—PCR结果显示K562／A02-CD—TK细胞有CD、TK基因特异性条带表达，而K562一CD—TK细胞无特异性条带。加入GCV、5-FC后，与K562-CD—TK细胞相比，K562／A02-CD—TK细胞存活率明显降低（在60μg／，mlGCV和600μg／ml5-FC联合作用后两种细胞存活率分别为85．04％和41．13％）（P〈0．05），凋亡率明显升高（同样浓度下分别为2．93％，10．27％）。结论mdrl启动子驱动的CD—TK双自杀基因系统可以靶向杀伤多药耐药的白血病细胞。
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