作者：孔德升; 郭泓珅; 蔡旭; 梁旺; 彭卓醇; 宋...蛋白质复性基因工程
摘要：目的克隆人组织因子途径抑制物-2（human tissue factor pathway inhibitor-2，hTFPI-2）的编码基因，并在大肠杆菌中表达，获得有活性的目的蛋白。方法应用RT—PCR法从人胎盘总RNA中获得人组织因子途径抑制物也的编码基因，将该基因片段克隆至原核表达载体pETl9b中，转化表达宿主BL21，用异丙基-B—D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导目的蛋白的表达。获得的包涵体经离子交换法进行纯化，并使其在体外进行复性。采用发色底物法测定hTFPI-2对纤溶酶、胰蛋白酶的抑制作用；明胶酶谱法测定对基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）的抑制作用；采用人工基底膜法观察hTFPI-2对纤维肉瘤细胞侵袭能力的影响。结果成功获得了序列完全正确hTFPI-2的编码基因，hTFPI-2在大肠杆菌中以包涵体的形式获得高效表达，占细菌总蛋白的20％～30％。经纯化、复性后可得到纯度大于90％的目的蛋白。复性后的hTFPI-2具有抑制胰蛋白酶、纤溶酶、MMP-2和MMP-9的活性，同时亦具有抑制纤维肉瘤细胞HT-1080侵袭转移的能力。结论采用原核表达系统高效地获得了具有活性的hTFPI-2。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
