作者：许文林; 沈慧玲; 袁伟; 王法春; 江云伟细胞株k562内皮生长因子发夹状核酶血管新生
摘要：目的探讨抗血管内皮生长因子（VEGF）发夹状核酶基因对白血病细胞裸鼠体内生长和肿瘤内血管生成的影响。方法采用脂质体介导的方法将抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体pcDNA—RZ转染白血病细胞系K562，G418抗性筛选获得阳性克隆；抽提基因组DNA，用PCR方法验证核酶基因已转入K562细胞；荧光定量PCR和免疫印迹反应检测白血病细胞中VEGFmRNA和蛋白表达量的改变；将白血病细胞皮下接种BALB／c裸鼠，观察转染细胞在裸鼠体内成瘤及生长情况；组织形态学和免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤微血管密度（MVD）。结果抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体pcDNA—RZ转入白血病细胞系K562（K562／RZ），G418筛选两周获得阳性克隆，PCR检测证实核酶基因整合人白血病细胞基因组DNA；与K562及K562／PC细胞（转染空质粒的K562细胞）相比，K562／RZ细胞VEGFmRNA和蛋白的表达量明显降低。接种K562、K562／PC和K562／RZ细胞组小鼠肿瘤终体积分别为（3．21±0．89）cm^3，（3．42±1．01）cm^3，（1．71±0．94）cm^3；肿瘤重量分别为（4．43±0．87）g，（3．96±0．94）g，（2．24±0．56）g；瘤体内MVD分别为4．70±1．25，4．67±1．31和1．80±1．55。以上各组之间的差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论转导抗VEGF发夹状核酶基因能减少白血病细胞中VEGF的合成，细胞裸鼠致瘤能力明显减弱，瘤体内血管形成能力降低。
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