作者：吴淑燕; 王兆钺; 董宁征; 张威; 白霞; 阮...遗传性基因突变分子模建
摘要：目的对1例遗传性凝血因子Ⅻ（FⅫ）缺陷症家系进行基因分析，探讨其发病的分子机制。方法用尿素溶解法和Berichrom kit检测患者及其家系成员血浆FⅫ的活性．用火箭电泳和酶联免疫吸附试验测定FⅫ抗原含量。PCR法扩增FⅫA基因的所有外显子和侧翼序列．DNA测序分析基因异常，用直接测序法和限制性内切酶（SfaNⅠ、NspⅠ）分析80名正常人相应序列的PCR产物以排除基因多态性。应用生物信息学软件对所鉴定的突变进行分子模建，探讨其致病的分子机制。结果患者纤维蛋白凝块在5mol／L尿素中30min内完全溶解，加入正常人血浆后则24h不溶解，患者血浆FⅫ活性为0，FⅫA抗原含量〈2％，FⅫB抗原含量在正常范围。家系成员中其父母和外祖母血浆FⅫ活性和FⅫA抗原约为正常人一半。在患者FⅫA基因外显子15中发现两处杂合异常，分别位于177246位碱基（C→T，导：致Arg703→Trp）和177286位碱摹（A→G，导致His716→Arg），直接测序和酶切分析两种方法均排除了基因多态性。患者的母亲与外祖母为Arg703→Trp杂合子，患者的父亲为His716→Arg杂合子．分子模建分析表明，Arg703和His716两个位点突变后均可导致barrel2与core结构域之间距离和结合能力的政变，使蛋白质发生错误折叠，稳定性降低。His716→Arg还可能影响酶的催化活性基因的空间结构形成。结论FⅫA基因外显子15上Arg703→Trp、His716→Arg复合杂合突变影响了蛋白质的正确折叠和稳定性，造成患者FⅫ抗原和活性的缺失。此复合杂合错义突变是一种未报道过的新的突变类型。
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